脂质体RNAiMAX介导siRNA转染沉默星形胶质细胞AQP4基因

发布时间：2017-11-18 12:14

  本文关键词：脂质体RNAiMAX介导siRNA转染沉默星形胶质细胞AQP4基因

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【摘要】：目的明确脂质体RNAiMAX(lipofectamine RNAiMAX)是否可以介导小干扰RNA(siRNA)转染入原代培养星形胶质细胞并实现水通道蛋白4(AQP4)基因沉默。方法利用原代培养的Wistar大鼠大脑皮层星形胶质细胞,通过倒置荧光显微镜和Tecan酶标仪,观察lipofectamine RNAiMAX是否能介导Cy3标记的siRNA转染入细胞内,以及RNAiMAX浓度和siRNA浓度对转染效率的影响;利用Real-time PCR方法检测AQP4 siRNA转染的基因沉默效果。结果倒置荧光显微镜和Tecan酶标仪检测发现,随着siRNA和RNAiMAX浓度的增加,转染细胞荧光强度随之增加(n=6);Real-time PCR检测结果显示,3ml/L RNAiMAX和30nmol/L AQP4 siRNA以及6ml/L RNAiMAX和60nmol/L AQP4 siRNA转染星形胶质细胞24h、48h、72h时,AQP4 mRNA水平均降低80%以上(n=6)。结论 Lipofectamine RNAiMAX可以介导siRNA转染入原代培养星形胶质细胞中并实现AQP4基因的沉默,3ml/L RNAiMAX和30nmol/L AQP4 siRNA即可达到理想的沉默效果。
【作者单位】： 首都医科大学北京市神经外科研究所病理生理学室;北德克萨斯大学健康科学中心药理学与神经科学系;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81271286) 北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养计划资助项目(2009-3-23)
【分类号】：R393
【正文快照】： 星形胶质细胞是脑水肿发生时出现肿胀的主要细胞类型[1]。水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)主要表达于星形胶质细胞足突,可以介导水分子及小分子物质跨细胞膜主动转运,与脑水肿发生发展密切相关[2]。研究AQP4在脑水肿时星形胶质细胞肿胀中的作用需要一种有效抑制AQP4基因表达的

【共引文献】

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本文编号：1199755