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两种脱矿体系制备人工龋损的病理学比较

发布时间:2016-09-24 12:31

  本文关键词:两种脱矿体系制备人工龋损的病理学比较,由笔耕文化传播整理发布。



2008年1月 第18卷第1期
CHINESE

中国比较医学杂志
JOURNAL
OF COMPARATIVE MEDICINE

January-,2008
-q01.18 No 1

jP!矗、g}翰吕、訇
§研究报告5
b、!^、±=、t;}、%、』
两种脱矿体系制备人工龋损的病理学比较
楚金普1,郝玉庆2,李继遥2,周学东2
(1.郑州大学口腔医学院牙体牙髓病科,郑州450052;2.四川大学口腔生物医学工程教育部重点实验室,成都610041)

【摘要】

目的

评价两种不同脱矿体系在人牙釉质与牛牙釉质形成人工龋样损害的情况,确定模拟早期龋实 两种脱矿体系:部分饱和酸缓冲溶液和酸性凝胶溶液,分别在人牙釉质与牛牙釉质制 部分饱和

验研究的脱矿系统。方法

备人工早期釉质龋损,采用偏振光显微镜和扫描电子显微镜观察实验人工龋的组织病理学变化。结果

的酸缓冲体系制备的人工龋损都具有完整的表层和表层下脱矿,牛牙釉质除了脱矿深度大于人牙釉质外,其它病 理学特点都类似于人牙釉质,与早期自然龋损相似。而凝胶液脱矿体系形成的人工龋损不管是人牙还是牛牙都没 有明显的表层结构,实验牙表面多出现被腐蚀或溶解。结论 部分饱和的酸缓冲液脱矿系统形成的人工龋损病理

学变化更接近于自然龋;与人牙具有相似化学组成的牛牙很适合代替人牙来检测脱矿和再矿化的效果。 【关键词】 脱矿溶液;人工龋;病理学研究 【文献标识码】A 【文章编号】1671—7856(2008)01.0023—03

【中图分类号】R783.1

Pathological Comparison of Two Type of Demineralization Solutions
on

the Production of Initial Artificial Enamel CariOUS Lesion

CHU

Jin—pul,HAO Yu—qin92,LI Ji—yao‘,ZHOU Xue.dongz

(1.Department of Cariology and Endodontology,Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,China;
2.Key Laboratory of Oral Biomedical Engineering of Ministry of Education,Sichuan University,Chengdu

610041,China)

【Abstract】Objective

To determine the effect of

two

type

of demineralization

solutions

on

the production

of artificial
an

carious lesion in bovine enamel and human enamel in hydroxyethyleellulose gel system
were

vitro.Methods

A partially saturated acidic buffer solution and

acidifed

used

as

decalcifying media for the preparation of initial artificial carious lesion in bovine specimens
was

enamel and human enamel.After demineralization,these enamel microscope and compared in histological pathology.Results

observed

by

microscope


and scaning electron

The results indicated all
were

specimens in
as

partially saturated acidic

buffer solution could morphologically Lesions in bovine teeth
were

form

subsurface
to

demineralization,which

the same

the early smooth enamel caries.
was

pathologically similar

those in human teeth,except that the lesions depth
were

deeper than those in either eroded
a or

human teeth.However,In gel,regular subsurface lesions dissolved.Conclusion It
was

hardly produced in all

specimens.They

were

concluded that caries—like lesions could be consistently produced in bovine enamel with
can

partially

saturated acidic buffer solution.So this demineralization system in dental enamel.

be

use

for reproducible

preparation of artificial carious lesions

【Key words】Demineralization

solutions;Artificial caries;Pathological study

龋病是细菌代谢碳水化合物产酸,引起牙齿硬
[基金项目] 国家自然科学基金重点资助项目(30430800)。

组织脱矿的结果。在龋病的研究中,由于自然形成

[作者简介]楚金普(1974一)讲师,博士,主要从事龋病的病因与防治研究。 [通讯作者] 周学东(1957一)女,教授,博士,主要从事龋病的病因与防治研究。

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早期龋的时间长,一般在6~18个月,结构多变,影 响因素多,使龋损的形成和再矿化机制无法在实验 室进行研究。为了研究龋病发生机制以及有效防治 方法,人工龋实验被广泛应用¨。。人工龋实验的关 键是模拟自然龋形成的条件和环境,尽可能的使人 工龋在破坏方式、病理改变特征上接近自然龋损。 本研究的目的是评价两种不同脱矿体系体外形成的 人工龋损,并以牛牙釉质与人牙釉质做比较,为龋病 的实验研究提供更接近自然龋的脱矿体系。 1材料与方法 1.1实验牙齿的制备 为达到统一的标准,本实验选择切牙为实验牙 齿。选择新鲜拔除的牛切牙和因外伤拔除的正常人 切牙,去除表面有机污染物,分离冠根,冠部超声清 洗,干燥,体视显微镜下观察无龋损、氟斑、裂痕。用 高速硬组织切割机将牙冠成5
mm×5 mm×2 mm

目的砂纸抛光,吸水干燥后,将载玻片放入二甲苯 中,使混合胶溶解,磨片与载玻片分离。每个样本制 备2张磨片,浸水24 h后用偏光显微镜观察。 1.5扫描电镜观察

实验牙齿从脱矿系统中取出立即放入2.5%戊
二醛液内固定24 h、4℃。转移到1%锇酸液内固定


h,用0.025 mol/L磷酸缓冲液漂洗,经50%无水乙

醇逐级脱水,临界点干燥,镀金,扫描电镜下观察,工 作电压为25 2结果
KV。

牙釉质龋损最重要的病理特征就是具有完整表
层的表层下脱矿¨1。当早期釉质龋损经不同折射系 数的媒介浸渍后用偏光显微镜观察时,可呈不同的 分层现象,当用水(折射率=1.33)浸渍磨片,偏光显 微镜下观察多孔的表层下釉质呈正性双折射(不透 光)而表层呈负性双折射。本实验结果显示,脱矿

大小的釉质块,唇面釉质用抛光机及800}}一1200#一 2400#碳化硅砂在流水下纸依次磨平、抛光,去除表 层约150 ptm,以消除表面有机污染物和表面的不规 则。自然干燥,釉质块表面开窗4 部位涂布两层抗酸指甲油。 1.2脱矿体系的配制 1.2.1部分饱和酸缓冲脱矿系统∽1:2.2 (NO,)2、2.2
mmol/LKH2P04、50 mmol/LCa mm×4

后,部分饱和的酸缓冲溶液处理的釉质样本,不管是
牛牙还是人牙,在偏振光显微镜下都形成以表层下

脱矿为主要特征的病理改变,可见明显呈负性双折
射的表层和紧接下面呈正性双折射的病损体部(图

mm,其余

1,图2),牛牙的脱矿深度要比人牙的深;而凝胶溶 液处理的样品几乎都没有明显的表层,表面许多被
腐蚀或溶解,只见呈正性双折射(不透光)的病损区 (图3,图4)。 在扫描电子显微镜下观察,正常釉质表面光滑。 mmol/L醋酸、1.0

mmol/L NaN3、0.1

mmol/LNaF,pH用5 mol/L的KOH

调至4.5。 1.2.2酸化凝胶脱矿系统【31:0.1 mol/L乳酸、6%w/ v羟乙基纤维素,pH用0.1 mol/L的NaOH调至4.5。 1.3实验方法 根据不同的脱矿溶液和牙齿的种类将实验分为 4组:(a)部分饱和的酸缓冲溶液+牛切牙组(b)部 分饱和的酸缓冲溶液+人切牙组(c)酸性凝胶溶液 +牛切牙组(d)酸性凝胶溶液+人切牙组。将预备 好的牙齿标本用嵌体蜡固定在自制的环形玻棒上, 分别放人盛有不同脱矿系统的玻璃器皿中,牙齿表 面与溶液的比率为25
mm2/10

脱矿后,酸缓冲溶液组病变表面脱矿较轻,牙釉质表
面呈现带有很多凹坑状的、不规则的外观,每一个凹 陷代表一条釉柱末端的破坏,牛牙与人牙略有不同, 且凹坑略大于人牙,在高倍下,可清楚见到釉柱的中

心溶解破坏,可见较清晰的、成束的晶体颗粒,这些 颗粒或短或长,方向排列一致,大多呈棒状末端或不 规则外形,牛牙的晶体颗粒较人牙的稍粗(图5~ 8)。而凝胶溶液组病变表面脱矿较重,牙釉质样本 表面呈明显的腐蚀状外观,釉柱间质溶解比较严重,
使釉柱头显得较为突出,呈叠瓦状,牛牙釉质釉柱明

mL,其中部分饱和酸

显大于与人牙;在高倍下元论牛牙还是人牙,晶体溶
解严重,晶体结构破坏(图9~12)。 3讨论

缓冲脱矿系统,37℃,磁搅拌仪搅拌(100 r/min);酸

化凝胶脱矿系统,25℃,不搅拌。脱矿4 d,取出实验
牙齿,分别作偏振光显微镜和扫描电镜观察分析。 1.4偏光显微镜观察 偏光显微镜的磨片采用贴附制备法。用自凝塑 胶将牙齿包埋,高速硬组织切割机从釉质开窗区的 中央将牙齿锯开,然后切成约300 btm厚的牙片,用 蜂蜡和冷杉胶混合胶将牙片贴附于载玻片上,待冷 固后,流水下磨制成薄片,约100 ptm;用粒度为1
200

使用人工龋实验技术大大增加了我们对龋齿发 生过程中脱矿和再矿化过程的认识。组织病理学研 究表明,自然龋损的最重要的特点就是具有完整表 层的表层下脱矿H。。采用人工方法研究龋病的发 生,最重要的条件就是要求产生的人工龋与自然龋 损愈相似愈好。人工龋虽然不能和自然龋完全一

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图1部分饱和的酸缓冲溶液+牛切牙组偏光显微镜照片×100;图2部分饱和的酸缓冲溶液+人切牙组偏光显微镜照片×100;图3凝 胶溶液+牛切牙组偏光显微镜照片×100;图4凝胶溶液+人切牙组偏光显微镜照片×100;图5酸缓冲溶液+牛切牙组扫描电镜x 000;图6酸缓冲溶液+牛切牙组扫描电镜x
30 3

000;图7酸缓冲溶液+人切牙组扫描电镜×3 000;图8酸缓冲溶液+人切牙组扫描

电镜×30 000;图9凝胶溶液+牛切牙组扫描电镜×3 000;图10凝胶冲溶液+牛切牙组扫描电镜×30 000;图11凝胶溶液+人切牙 组扫描电镜×3 000;圈12凝胶冲溶液+人切牙组扫描电镜×30
Fig.1 Polarized light microscopic pictures of lesions from bovine enamel microscopic pictures of lesions from human enamel 000. with


partially saturated acidic

buffer

solution.(scale

bar=100

mm):Fig.2
PoIarized of lesions

Polarized light light

with



partially saturated acidic

buffer solution.(seale bar=100 am);Fig.3
Polarized light


microscopic

pictures of lesions from with acidifed gel 000

bovine enamel with bar=100

acidifed

gel

system(scale

bar=100

mm);Fig.4

microscopic pictures

from human enamel

system(scale

Inn):Fig.5 from

SEM pictures bovine enamel

of lesions from bovine enamel with with


partially saturated acidic buffer

solution(scale

bar=3 SEM

lnln);Fig.6

SEM pictures

of lesions


partially saturated

acidic
bar=30

buffer 000

solution(scale mm);Fig.8

bar=30 000 SEM pictures

mm);Fig.7
of lesions from with aeidifed Fig.11 with

pictures of lesions from with


human enamel with

partially saturated acidic

buffer solution(scale mill);Fig.9
with

human enamel

partially saturated acidic 000

buffer solution(scale

bar=3 000

SEM

pictures of gel

lesions from bovine enamel bar=30 000

gel

system(SCale bar=3
pictures of lesions from

mm);Fig.10
mm).

SEM pictures of lesions from

bovine enamel 000

acidifed

system(scale

mm):

SEM gel

human enamel with 000

acidifed

gel

system(scale bar=3

ulm);Fig.12

SEM pictures of lesions from huInan enamel

acidifed

system(scale bar=30

样,但能模拟龋病的主要病变的发生发展过程,对研 究龋病发病机理、探索防治措施具有重要意义。目

和位于其下呈正性双折射的病损体部,完全符合自
然早期釉质龋损表层下脱矿的重要病理特征。经酸

前,真正在实验室完全可控制条件下制备人工龋的
方法,只有化学法。脱矿的基本过程依次为酸扩散 进入釉质,与晶格离子发生反应和反应产物的溶 出b J,这种酸脱矿致龋作用就是化学法制备人工龋

性凝胶脱矿系统形成的人工龋没有明显的表层,表
面大多被酸蚀或溶解。

扫描电子显微镜观察,部分饱和的酸缓冲脱矿 系统形成的人工龋釉质表层相对完整,但表面釉柱 形态破坏,釉柱中心溶解凹下,不规则的多孑L状外观 结构增多,但凹较浅,这些多孑L状结构是加深的 Tome’S突和拓宽的釉拄鞘,与Moller等№o观察到的 自然龋的表面结构相似。酸化凝胶脱矿系统形成的 人工龋表面呈明显的酸蚀样外观,釉柱外周溶解,中 心突出,边界清晰,呈典型的鱼鳞状。 本实验通过牛牙与人牙的比较,发现牛牙釉柱

的理论依据。化学法主要分为部分饱和酸缓冲脱矿 系统和酸性凝胶脱矿系统两大类。本实验就两类中 常用的两种脱矿体系体外形成人工龋损的情况作一 比较,确定能形成病理学上更接近于自然龋的脱矿 体系。本实验结果显示经部分饱和的酸缓冲脱矿系 统所制备的人工龋损,用水(折射率=1.33)浸渍后, 偏光显微镜下观察,可见明显呈负性双折射的表层

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Med,January

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扩8。88匈 ¥研究动态15
笆}坊{石、、蛤{#;\!y

Considerations for determining optimal mouse caging density
Charmaine Fohz,DVMl,Larry ’PhD4,Pascalle Van

Carbone,DVM,,PhD2,David DeLong,DVM3,Bernard E.Rollin Loo,PhD5,Julia Whitaker,DVM6&Axel Wolff,DVM7

Division of Veterinary Resources,National Institutes of Health,Bethesda,MD.


University of

California San Francisco,San Francisco,CA.



Veterinary Medical Unit,VA Medical Center,Minneapolis,MN. Colorado State University,Fort Collins,CO. Utrecht





University,The Netherlands.
of Pathology and Laboratory Medicine,Division of



Department

Laboratory

Animal Medicine,University of North Carolina,Chapel Hill,NC.


Division of Compliance

Oversight,OLAW,National Institutes of Health,Bethesda,MD.
to

Correspondence should be addressed

Charmaine Fohz,DVM

At the 2006 National question of what guidelines
are

Meeting of the American Association of Laboratory Animal Science,a
or

panel discussed the that present

constitutes optimal

acceptable housing density for mice.Though there is



consensus

somewhat arbitrarily defined,scientific research has not yet been able to provide elear recommendations for explored the many factors that influence decisions
on

amending them.Speakers

mouse

housing,including

regulatory

requirements,scientific data and

their interpretation,financial considerations

and

ethical concerns.The panel largely

agreed that animal well-?being should be the measure of interest in evaluating housing density and that well?-being includes
not

only physical health,but also animals’behavior,productivity and preference.Lab Animal

2007,36(10)

万方数据  



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本文编号:121873

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