针对人Tudor-SN蛋白T103位点的应激磷酸化抗体制备及分析
本文关键词：针对人Tudor-SN蛋白T103位点的应激磷酸化抗体制备及分析 出处：《中国生物工程杂志》2014年06期 论文类型：期刊论文
【摘要】：目的:针对人Tudor-SN蛋白T103位点(103位苏氨酸,Thr103)制备兔源多克隆磷酸化抗体,并进行应激磷酸化的时相分析。方法:首先人工合成含磷酸化T103(pT103)位点的多肽,4次免疫新西兰大白兔后获取抗血清;然后以AKTA蛋白纯化系统进行纯化,并利用Western blotting和细胞免疫荧光实验对纯化后的抗pT103抗体进行鉴定;最后以In-cell Western法进行Tudor-SN蛋白的应激磷酸化/去磷酸化时相性分析。结果:(1)确定并合成磷酸化多肽"TIENKpTPQGRC",收集约75 ml兔源抗血清,纯化后获取2.08 mg/ml抗pT103抗体;(2)当HeLa细胞受到氧化应激时,以pT103抗体检测的磷酸化信号增强,可在胞浆中检测到颗粒状信号,与内源性Tudor-SN应激颗粒存在共定位关系;(3)在氧化应激及应激去除后恢复过程中,T103位点的磷酸化水平呈现一定的波动性时相。结论:成功制备针对Tudor-SN蛋白T103位点的兔源多克隆抗pT103抗体,有助于从磷酸化修饰角度进行Tudor-SN在细胞应激方面的机制探讨。
【作者单位】： 天津医科大学基础医学研究中心;天津医科大学药学院;天津医科大学基础医学院;
【基金】：国家自然科学基金(31100967,31170830,31370749,21305103,31300709) 国家杰出青年基金(31125012) 教育部创新团队发展计划(IRT13085)资助项目
【分类号】：R392
【正文快照】： 人类Tudor-SN蛋白参与基因转录[1]、pre-mRNA剪切[2]、细胞凋亡[3]等多种生物学过程。本课题组前期研究结果表明,当真核细胞受到外界刺激如0.5 mmol/L亚砷酸钠氧化应激或45℃热休克时,Tudor-SN蛋白可与G3BP(Ras-GAP SH3 domain-binding protein)蛋白结合,在胞浆中呈颗粒状聚集
【共引文献】
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，本文编号：1328910
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