Ⅱ型肺上皮细胞表达Cre重组酶转基因小鼠的建立

发布时间：2017-12-31 23:11

  本文关键词：Ⅱ型肺上皮细胞表达Cre重组酶转基因小鼠的建立　出处：《中国人民解放军军事医学科学院》2005年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：Ⅱ型肺上皮细胞能够合成和分泌肺表面活性物质(pulmonary surfactant,PS),调控肺的功能并与肺损伤后的修复有关。很多肺相关疾病的发生伴随有Ⅱ型肺上皮细胞功能不全及PS系统缺陷。然而Ⅱ型肺上皮细胞在肺的发育、机体免疫及疾病的发生发展过程中的具体功能尚不明确,对调控Ⅱ型肺上皮细胞功能的遗传机制也知之甚少。 为了利用Cre-LoxP系统研究调节Ⅱ型肺上皮细胞功能的遗传机制,我们研制了表面活性蛋白(SP-A)启动子指导Cre重组酶基因在转基因小鼠Ⅱ型肺上皮细胞中表达的转基因小鼠。构建了含有表面活性蛋白A(SP-A)启动子、Cre重组酶基因和人生长激素基因polyA的转基因载体pSP-A-Cre。通过显微注射将线性化的转基因载体引入小鼠808枚受精卵中,其中729枚移植入36只假孕母鼠的输卵管中使其发育,共获得子代小鼠133只。经PCR和Southern检测鉴定出11只在基因组上整合有Cre重组酶基因的小鼠。将整合有Cre重组酶基因的首建者小鼠与Smad4条件基因打靶小鼠及ROSA26报告小鼠交配,利用基因组PCR和LacZ染色检测Cre重组酶表达的组织分布及其体内介导LoxP位点间重组的活性。结果显示我们获得了2个具有不同组织表达谱的Cre重组酶转基因小鼠。SP-A-Cre1转基因小鼠的肺、脑和消化道组织中表达Cre重组酶,Cre表达的组织分布与前人报道的SP-A组织分布一致。SP-A-Cre2转基因小鼠仅在肺组织中特异性表达Cre重组酶。将SP-A-Cre1转基因小鼠与Smad4条件打靶小鼠(Smad4~(co/co))交配获得了Smad4基因剔除小鼠。SP-A-Cre1;Smad4~(co/co)小鼠出生后2天开始出现体形矮小,头颅发育异常,出生后5天死亡。 所有这些结果表明本研究研制的两株SP-A-Cre转基因小鼠均在Ⅱ型肺上皮细胞中表达有活性的Cre重组酶。这些SP-A-Cre转基因小鼠是在Ⅱ型肺上皮细胞进行条件基因剔除研究以及进行SP-A表达细胞谱系分析的有力工具。
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本文编号：1361870