EAP2的双稳态表达主控白念珠菌白—灰形态的转换

发布时间：2018-03-04 22:32

  本文选题：白念珠菌　切入点：EAP2　出处：《中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）》2006年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：白念珠菌(Candida albicans)是一种人类常见的机会致病真菌,常导致免疫系统受损的人群粘膜表面或系统感染。白念珠菌至少有七种不同形态,不同形态的菌落之间可以高频率的相互转换,不同形态之间转换能力与白念珠菌致病能力密切相关。其中研究较多的是酵母形态-菌丝形态和白菌-灰菌形态转换。 特定条件下酿酒酵母能进行侵入生长和丝状生长,其调控机制已研究的比较清楚。为了研究白念珠菌形态转换的调控是否也存在类似的机制,我们利用酿酒酵母单倍体flo8缺失株,通过功能互补的方法筛选白念珠菌基因组文库,以获得白念珠菌形态发生相关的基因。我们筛选得到EAP2和CZF2等多个基因,EAP2和CZF2都能校正flo8缺失株侵入生长缺陷。EAP2基因编码一个785个氨基酸的蛋白。氨基酸序列分析表明,Eap2的N端含有一个真菌特异性的Tos9结构域,其主要特征是包括一个非常保守的序列模式(~(64)KRWTDG~(69)),是一个可能的PKA磷酸化位点。Eap2蛋白N-端有一个核定位信号序列,GFP-Eap2融合表达发现,Eap2定位于细胞核内。CZF2编码一个624个氨基酸的蛋白,属于Gal4蛋白家族,其N-端含有一保守的C6型锌指结构Zn2Cys6 DNA结合结构域。 保守的MAPK途径和cAMP/PKA信号转导途径均参与了酿酒酵母和白念珠菌形态发生的调控,利用酿酒酵母缺失株,我们分析了Eap2和Czf2的功能。在酿酒酵母双倍体缺失株中,Eap2和Czf2都能校正ste12,ste7,tec1和flo8在氮源缺乏条件下菌丝生长的缺陷。在酿酒酵母单倍体缺失株中,Eap2和Czf2能校正ste12,ste7,tec1和flo8在碳源缺乏条件下侵入生长的缺陷。说明Eap2和Czf2在酿酒酵母菌丝生长和侵入生长中的激活作用绕过了MAPK途径和Flo8因子的需求。 Northern杂交分析表明,EAP2基因有两个大小不同的转录本,分别为～
[Abstract]:Candida albicansis is a common opportunistic fungus that causes mucosal surface or systemic infections in people with impaired immune systems. Candida albicans. there are at least seven different forms of Candida albicans. there are at least seven different forms of Candida albicans. The ability of transformation between different forms is closely related to the pathogenicity of Candida albicans. Under certain conditions, Saccharomyces cerevisiae can carry out invasive growth and filamentous growth, and its regulatory mechanism has been studied clearly. In order to study whether there is a similar mechanism in the regulation of morphological transformation of Candida albicans, The genomic library of Candida albicans was screened by functional complementation using the haploid flo8 deletion strain of Saccharomyces cerevisiae (Saccharomyces cerevisiae). In order to obtain the genes related to the morphogenesis of Candida albicans, we screened several genes, such as EAP2 and CZF2, EAP2 and CZF2, which can correct the invading growth defect of flo8 deletion strain. EAP2 gene encodes a 785 amino acid protein. The N-terminal of Eap2 contains a fungal specific Tos9 domain. Its main feature is that it includes a very conserved sequence pattern, the KRWTDGGN 69.It is a possible phosphorylation site of PKA. Eap2 protein has a nuclear localization signal sequence (GFP-Eap2) at the N- end of the nucleolus. It is found that Eap2 encodes a 624 amino acid protein located in the nucleus. It belongs to Gal4 protein family, and its N-terminal contains a conserved Zn2Cys6 DNA binding domain of C6 zinc finger structure. The conserved MAPK pathway and cAMP/PKA signal transduction pathway were involved in the morphogenesis of Saccharomyces cerevisiae and Candida albicans. We analyzed the functions of Eap2 and Czf2. Both Eap2 and Czf2 could correct the mycelium growth defects of ste12ste7tec1 and flo8 in the absence of diploidy in Saccharomyces cerevisiae. Eap2 and Czf2 could correct the growth of ste12hste7tec1 and Czf2 in haploid deficient strains of Saccharomyces cerevisiae. The deficiency of flo8 invasion growth in the absence of carbon source indicated that the activation of Eap2 and Czf2 in the mycelium growth and invasion growth of Saccharomyces cerevisiae bypassed the demand of MAPK pathway and Flo8 factor. Northern blot analysis showed that the EAP2 gene had two transcripts of different sizes.
【学位授予单位】：中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R379

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