重组线虫抗凝肽的表达与纯化
本文选题：线虫抗凝肽 切入点：表达 出处：《安徽医科大学》2005年硕士论文
【摘要】：动静脉血栓形成是人类发病及死亡的主要原因,现有的抗凝血药物由于副作用较大,在治疗凝血功能异常中的应用比较局限,所以新型抗凝药物的开发具有重要的临床意义。线虫抗凝肽(Nematode anticoagulant peptides,NAPs)是一类从犬钩口线虫体内提取的小分子多肽类物质,这类多肽具有高效抗凝作用,皮摩尔浓度就可以抑制血液凝集,因此重组线虫抗凝肽(Recombinant nematode anticoagulant peptide,rNAP)有望开发成一种新型的高效抗凝药物。 目的 本研究采用大肠杆菌(Escherichia coli, E. coli)融合表达rNAP5,并进行了纯化及活性方面的研究,以期为新型抗凝药物的开发应用打下基础。 方法与结果 1.表达载体的构建及目的蛋白的表达 含有融合E. coli硫氧还原蛋白(Thioredoxin,TRX)的NAP5全基因序列的质粒pET11a/TRX-rNAP前期已经由本实验室构建,为了方便后期的纯化工作,本研究中以pET11a/TRX-rNAP质粒为模板,PCR扩增出HIS-TRX-rNAP全长序列,插入pET11a载体的NdeI和BamHI酶切位点之间,构建出pET11a/HIS-TRX-rNAP表达载体,转化入DH5α菌株,经测序证实成功地在TRX-rNAP序列前方插入8个组氨酸(Histidine,HIS)三联密码子。将测序正确的质粒在E. coli BL21(DE3)菌株中经IPTG诱导表达,并通过SDS-PAGE及Western blot检测证实,融合蛋白HIS-TRX-rNAP在
[Abstract]:Anticoagulant peptide ( rNAP ) is a kind of new kind of high - efficiency anticoagulant peptide , which can inhibit blood coagulation because of its high anti - coagulation effect , and thus the recombinant nematode anticoagulant peptide ( rNAP ) is expected to be developed into a new kind of high - efficiency anticoagulant .
Objective To study the fusion expression of rNAP5 by Escherichia coli and E . coli , and to study the purification and activity of rNAP5 , in order to lay a foundation for the development and application of new anticoagulant drugs .
Methods and Results
1 . Construction of expression vector and expression of target protein
In order to facilitate the later purification , the full - length sequence of the plasmid pET11a / trNAP was amplified by PCR . The recombinant plasmid pET11a / HIS - rNAP was inserted between the NdeI and BamHI sites of the pET11a vector . The recombinant plasmid pET11a / HIS - trNAP was inserted into the sequence of the pET11a / HIS - rNAP expression vector . The recombinant plasmid pET11a / HIS - trNAP was inserted into the sequence of the pET11a / HIS - rNAP expression vector . The recombinant plasmid pET11a / HIS - rNAP was inserted into the sequence of the pET11a / HIS - rNAP expression vector . The recombinant plasmid pET11a / HIS - rNAP was inserted into the E . coli BL21 ( DE3 ) strain to induce the expression of the three - linked codons .
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R346
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，本文编号：1671685
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