两种免疫刺激剂CpG ODN与Poly（I∶C）联合应用佐剂效果的研究

发布时间：2018-04-29 11:07

  本文选题：CpG + ODN　； 参考：《中国协和医科大学》2007年硕士论文

【摘要】： 目的： 选择两种新型的生物型免疫刺激剂CpG ODN和poly(I：C)联合作为多肽抗原佐剂，通过体外及体内多种免疫功能指标的检测，探讨二者联合与多肽免疫的佐剂效果。 方法： 在体外，用CpG 2395和poly(I：C)单独或联合刺激脾细胞，进行细胞因子分泌情况以及细胞增殖能力的检测；在体内，CpG 2395和poly(I：C)单独或者联合作为MUC1多肽抗原的佐剂免疫小鼠，通过细胞免疫水平和体液免疫水平两个方面的检测评价各组间免疫水平的差别。主要包括ELISA方法检测免疫血清中的抗体滴度、CTL杀伤实验检测杀伤性T细胞的细胞毒作用、流式细胞技术分析免疫前后各细胞亚群的变化，等等；在肿瘤预防实验中，通过抑瘤率以及肺转移结节数等指标评价二者作为佐剂对MUC1免疫小鼠肿瘤预防效果的影响。 结果： 体外用CpG 2395、poly(I：C)、以及二者联合与正常小鼠的脾细胞混合培养24h后收集细胞培养上清，检测到CpG 2395与poly(I：C)联合与单独应用相比能更好地诱导IL-12、TNF-α以及IFN-γ的产生。CpG 2395与poly(I：C)联合作为MUC1多肽的佐剂免疫C57BL／6小鼠后，检测血清中抗MUC1多肽的抗体，并未见到联合组效价比单用组高。对免疫后小鼠脾细胞进行流式细胞术分型，，联合组小鼠CD4+T细胞及CD8+细胞数量均较单用组升高。CpG 2395、poly(I：C)联合作为佐剂与MUC1联合免疫C57BL／6小鼠后接种Lewis肺癌后，对肺癌的预防效果优于CpG 2395或poly(I：C)单独作为佐剂的平行组。而且肺转移灶的数量也明显较少。 结论： 合成的MUC1蛋白两个重复序列的多肽，可以作为肿瘤疫苗，表现出有效的肿瘤预防作用。CpG 2395、poly(I：C)联合作为可溶性多肽疫苗的免疫佐剂，与单用相比能更有效地增强机体的抗肿瘤免疫应答。
[Abstract]:Objective: Two novel biological immunostimulants CpG ODN and polypeptide I: C) were selected as polypeptide antigen adjuvants. The adjuvant effect of the combination of them and polypeptide immunity was studied by detecting various immune function indexes in vitro and in vivo. Methods: In vitro, spleen cells were stimulated with CpG 2395 and polychylinic I: C alone or in combination to detect cytokine secretion and cell proliferation. In vivo, CpG 2395 and polychlor I: C) were used to immunize mice as adjuvants of MUC1 polypeptide antigen alone or in combination. Cellular immunity and humoral immunity were measured to evaluate the difference of immune level among groups. It mainly includes the detection of antibody titer in immune serum by ELISA assay, the cytotoxicity of killer T cells, the changes of subsets of T cells before and after immunization by flow cytometry, and so on. The effect of the two adjuvants on tumor prevention of MUC1 immunized mice was evaluated by tumor inhibition rate and the number of metastatic nodules. Results: In vitro, the supernatants were collected by CpG 2395 polyI: Con and combined culture with spleen cells of normal mice for 24 hours. It was found that the combination of CpG 2395 and polychlor I: C) could induce the production of IL-12 TNF- 伪 and IFN- 纬 as adjuvant of MUC1 polypeptide. After immunizing C57BL/6 mice with MUC1 polypeptide, the antibody against MUC1 polypeptide in serum was detected. It was not seen that the titer of the combined group was higher than that of the single use group. The spleen cells of immunized mice were classified by flow cytometry. The numbers of CD4 T cells and CD8 cells in the combined group were higher than those in the control group. CpG 2395 CD4 / C) combined as adjuvant and MUC1 combined immunized C57BL/6 mice were inoculated with Lewis lung cancer. The prophylactic effect on lung cancer was superior to that of CpG 2395 or poly (I: C) alone as an adjuvant parallel group. And the number of lung metastases is also significantly less. Conclusion: The synthesized polypeptides with two repeat sequences of MUC1 protein can be used as tumor vaccine, showing effective tumor prophylaxis. CpG 2395 polypeptide I: C) can be used as immune adjuvant of soluble polypeptide vaccine. Compared with the single use, it can enhance the body's anti-tumor immune response more effectively.
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R392;R730.5

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本文编号：1819668