SARS病毒S蛋白基因在大肠杆菌和家蚕中的表达

发布时间：2018-05-10 22:18

  本文选题：SARS病毒 + S蛋白　； 参考：《苏州大学》2005年硕士论文

【摘要】：本次研究既将pUCY-SARS 质粒中含有的SARS 病毒S 蛋白基因的部分序列,分别在大肠杆菌BL21 和家蚕细胞以及家蚕幼虫体内进行表达。 在大肠杆菌表达系统中首先将S 蛋白基因克隆到大肠杆菌表达载体pET28a(+)构建获重组大肠杆菌载体pET28a-S,将pET28a-S 在大肠杆菌BL21 中利用IPTG 进行诱导表达。 在杆状病毒表达系统中将S 蛋白基因克隆到杆状病毒转移载体pBacPAK-His 中,构建重组杆状病毒转移载体pBacPAK-S,重组杆状病毒转移载体pBacPAK-S 与线性化杆状病毒BmBacPAK-6 共转染BmN 细胞,经筛选获得重组杆状病毒BmBac-S,并将其在细胞和家蚕中进行表达。 表达产物经SDS-PAGE、Western Blotting 分析表明,大肠杆菌和家蚕中的表达产物的分子量分别为27 kDa 和30kDa 左右,重组病毒感染后的第5 天达到最高表达水平,约占血淋巴总蛋白的1.2%。另外利用金属螯合亲和层析纯化方法对BmN 细胞中的表达产物进行纯化,得到相对较纯的重组蛋白。
[Abstract]:In this study, some sequences of S protein gene of SARS virus contained in pUCY-SARS plasmid were expressed in E. coli BL21, silkworm cells and silkworm larvae, respectively. In Escherichia coli expression system, S protein gene was first cloned into E. coli expression vector pET28a () to construct recombinant E. coli vector pET28a-S. pET28a-S was induced by IPTG in Escherichia coli BL21. In the baculovirus expression system, the S protein gene was cloned into the baculovirus transfer vector pBacPAK-His, and the recombinant baculovirus transfer vector pBacPAK-Swas constructed. The recombinant baculovirus transfer vector pBacPAK-S and the linearized baculovirus BmBacPAK-6 were co-transfected into BmN cells. The recombinant baculovirus BmBac-Swas obtained and expressed in cells and silkworm. SDS-PAGEN Western Blotting analysis showed that the molecular weight of the expressed products in E. coli and Bombyx mori were about 27 kDa and 30kDa respectively, and reached the highest level on the 5th day after infection, accounting for 1.2% of the total hemolymph protein. In addition, the expression product of BmN cells was purified by metal chelate affinity chromatography, and a relatively pure recombinant protein was obtained.
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R346

【参考文献】

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本文编号：1871161