结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶基因的克隆表达及酶学性质研究

发布时间：2018-05-19 17:59

  本文选题：分枝杆菌 + 结核　； 参考：《中华结核和呼吸杂志》2005年12期

【摘要】：目的获得具有生物学活性的结核分枝杆菌重组异柠檬酸裂解酶蛋白。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增该菌株的异柠檬酸裂解酶基因ic l,克隆入原核表达载体pET-28 a(+)中,通过在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,获得以镍离子螯合型琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化的重组蛋白,并对其酶学性质进行测定分析。结果纯化出具有生物学活性的重组结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶。酶学性质测定分析表明,重组异柠檬酸裂解酶ICL的比活力为7.657×102μmol.mg-1.m in-1,反应最适pH值约为7.4。重组蛋白经高效液相色谱及质谱鉴定,测得相对分子质量为50 603.347。在5 mmol/L Tris-C l缓冲液、pH值7.8、25℃条件下,重组ICL的二级结构中相对有43.8%的α螺旋、31.9%的β折叠、3.4%β转角、20.9%无规则卷曲。结论本研究成功克隆表达结核分枝杆菌H37Rv异柠檬酸裂解酶基因,酶学性质鉴定获得了具有生物学活性的重组蛋白,为该酶免疫学研究及新型抗结核药物的筛选奠定了基础。
[Abstract]:The recombinant protein of Mycobacterium tuberculosis H37Rv was cloned into prokaryotic expression vector pET - 28 a ( + ) . The recombinant protein was purified by high performance liquid chromatography and mass spectrometry .
【作者单位】：
【基金】：国家自然科学基金资助项目(30270072) 国家基础研究973基金资助项目(2002CB512804) 上海市博士后基金资助项目(04R214132)
【分类号】：R378

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：1911093