HIV-1膜蛋白gp140三聚体疫苗的构建和免疫原性研究

发布时间：2018-05-24 02:31

  本文选题：Ⅰ型艾滋病病毒CN株 + 疫苗　； 参考：《中国艾滋病性病》2014年03期

【摘要】：目的构建表达中国流行株HIV-1CRF_07B/C亚型(HIV-1CN54)膜蛋白gp140和gp140FdFc三聚体疫苗,比较其免疫原性。方法构建gp140和gp140FdFc重组质粒,将质粒分别瞬时转染293F细胞,120小时后收获上清液,经纯化、浓缩、PBS置换、BCA试剂盒检测蛋白质浓度后,利用SDS-PAGE电泳检测蛋白分子量大小及纯度,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其与阳性病人血清的反应性。通过肌肉注射的方式分别免疫兔子,取兔子血清,ELISA检测血清抗体,并通过假病毒系统检测血清中和抗体滴度,比较gp140和gp140FdFc的免疫原性。结果成功获得基因重组gp140和gp140FdFc蛋白。免疫兔子后,gp140和gp140FdFc蛋白质均有很强的体液免疫应答,抗gp160抗体滴度分别为2.24×105和4.48×105,但gp140组未诱导出中和抗体,gp140FdFc组对4种假病毒具有一定的中和活性。结论 Gp140FdFc三聚体能诱导兔子产生较强的结合抗体和一定的中和抗体反应,可作为潜在的HIV-1免疫原进行疫苗研究。
[Abstract]:Objective to construct and compare the immunogenicity of gp140 and gp140FdFc trimer vaccine expressing HIV-1CRF_07B/C subtype 1 CN54. Methods Recombinant plasmids of gp140 and gp140FdFc were constructed. The supernatants of 293F cells were instantly transfected into the plasmids for 120 hours. The supernatants were purified, then the protein concentration was detected by concentrated PBS replacement kit, and the molecular weight and purity of the proteins were detected by SDS-PAGE electrophoresis. Enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) was used to detect its reactivity to the serum of positive patients. Rabbits were immunized by intramuscular injection and serum antibodies were detected by Elisa. The immunogenicity of gp140 and gp140FdFc was compared by using pseudovirus system to detect neutralizing antibody titers. Results the recombinant gp140 and gp140FdFc proteins were successfully obtained. Both gp140 and gp140FdFc protein had a strong humoral immune response, the titers of anti gp160 antibody were 2.24 脳 10 5 and 4.48 脳 10 5, respectively, but the neutralizing antibody gp140 Fc group was not induced to neutralize the four pseudoviruses in gp140 group. Conclusion Gp140FdFc trimer can induce strong binding antibody and neutralizing antibody reaction in rabbits and can be used as a potential HIV-1 immunogen for vaccine research.
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心
【基金】：国家科技重大专项(2012ZX10001008-012) 传染病预防控制国家重点实验室(2012SKLID402)~~
【分类号】：R392

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本文编号：1927342