李斯特菌侵染Vero细胞诱发磷脂酶D活性变化的初步研究

发布时间：2018-05-24 03:22

  本文选题：李斯特菌 + 磷脂酶D　； 参考：《苏州大学》2007年硕士论文

【摘要】： 目的 本实验以产单核细胞李斯特菌(简称李斯特菌)感染Vero细胞,建立细菌侵入非吞噬细胞的模型,对李斯特菌刺激下的Vero细胞内PLD活性变化及其对李斯特菌侵染量的影响进行初步研究。 方法 1、将李斯特菌以不同感染比(细菌:细胞)及不同感染时间刺激Vero细胞,观察Vero细胞内PLD活性及李斯特菌侵染量的变化。李斯特菌的侵染量用Vero细胞内释放的活菌数表示。PLD的活性用在乙醇存在条件下,其催化产生的特异性产物磷脂酰乙醇在[9,10-3H]油酸标记的磷脂类化合物总量中的百分比表示。 2、分别以PLD的不同化学抑制剂(1-丁醇及2,3-二磷酸甘油酸)预处理Vero细胞,再以李斯特菌刺激,观察Vero细胞内PLD活性变化对李斯特菌侵染量的影响。 3、分别用人PLD1野生型(hPLD1wt)及功能缺陷型(hPLD1-K898R)、鼠PLD2野生型(mPLD2wt)及功能缺陷型(mPLD2-K758R)的重组腺病毒预感染Vero细胞,以空白腺病毒作对照,再以李斯特菌刺激,观察不同亚型PLD蛋白在Vero细胞内的过量表达对李斯特菌诱导的胞内PLD活性变化及李斯特菌侵染量的影响,以确定可能参与调控李斯特菌侵染Vero细胞的PLD亚型。 结果 1、在一定范围内,李斯特菌的侵染量随着感染比的增加(100:1、200:1、400:1)和感染时间的延长(30min、60min、120min)而升高。并且在李斯特菌内化侵入Vero细胞的过程中确实伴有PLD的激活,与Vero细胞内PLD的基础活性相比,李斯特菌的刺激可导致Vero细胞内PLD活性升高4倍左右。李斯特菌刺激不同时间后(15min到90min)Vero细胞内的PLD活性呈现动态变化:与基础活性相比,李斯特菌刺激15min后,PLD即显示较高活性;随着刺激时间的延长,PLD的活性也随之增高,但在40min到90min之间趋于稳定。 2、1-丁醇的预处理可导致李斯特菌刺激下的Vero细胞内PLD活性显著降低(约60%左右),并且李斯特菌的侵染量也明显下降(约68%左右);2,3-二磷酸甘油酸的预处理同样可导致李斯特菌刺激下Vero细胞内PLD活性的降低和李斯特菌侵染量的下降。 3、4株PLD重组腺病毒可有效感染Vero细胞,并对Vero细胞内PLD的基础活性影响不大。hPLD1wt蛋白的过量表达使李斯特菌刺激下的Vero细胞内PLD活性上升50%左右;而hPLD1-K898R和mPLD2-K758R蛋白的过量表达使李斯特菌刺激下的Vero细胞内PLD活性下降40%左右,并且分别使李斯斯特菌的侵染量下降了51%和58%。 结论 李斯特菌诱导的Vero细胞对其吞噬的过程中确实伴有PLD的激活,其活性的降低对李斯特菌的内化侵入过程有抑制作用。PLD1和PLD2两种亚型可能均与李斯特菌刺激下的Vero细胞内PLD的激活有关,并共同参与调节李斯特菌内化侵入Vero细胞。有关PLD在李斯特菌内化侵入Vero细胞过程中的具体激活机制及功能有待进一步研究。
[Abstract]:Purpose






In this experiment , Vero cells were infected with listerias , and a model of non - phagocyte invasion was established . The changes of PLD activity in Vero cells under the stimulation of listeride and its effect on the infection amount were studied .






method






1 . Vero cells were stimulated with different infection ratios ( bacteria : cells ) and time of different infection times to observe the variation of PLD activity in Vero cells and the amount of listeriolyticum infection . The activity of PLD was expressed by the number of viable bacteria released in Vero cells . The activity of PLD was expressed as a percentage of the total number of phospholipid compounds labeled with 9 , 10 - 3H - oleic acid in the presence of ethanol .






2 . Vero cells were pretreated with different chemical inhibitors of PLD ( 1 - butanol and 2,3 - diphosphoglyceric acid ) . The effects of PLD activity in Vero cells on the infection rate were observed .






3 . Vero cells were pre - infected with recombinant adenovirus of human PLD1 wild type ( hPLD1 wt ) and functional defect type ( hPLD1 - K89R ) , mouse PLD2 wild - type ( mPLD2wt ) and functional defect type ( mPLD2 - K75R ) .






Results






1 . With the increase of infection ratio ( 100 鈭，

本文编号：1927488