新生昆明小鼠胰腺干样细胞的分离、体外培养及初步鉴定

发布时间：2018-06-30 01:14

  本文选题：胰腺干样细胞 + 巢蛋白(Nestin)　； 参考：《广西医科大学》2006年硕士论文

【摘要】： 目的:自新生昆明小鼠胰腺组织中分离出胰腺干样细胞,在体外条件下培养,观察其形态学和生物学特性,并进行初步鉴定;在胚胎成纤维细胞作为饲养层的培养条件下进行连续传代,获得单一性和富集度均较高的胰腺干样细胞。 方法:取新生SPF级昆明小鼠的胰腺组织,使用Ⅴ型胶原酶消化,采用Percoll不连续密度梯度离心,使胰腺组织内、外分泌部细胞分散在三个不同的密度界面,通过双硫腙染色结合细胞生长特性对细胞来源进行检测;来源于胰腺内、外分泌部的细胞,分别以无血清、添加bFGF和EGF等生长因子的低糖DMEM培养液培养,倒置相差显微镜下观察其形态学特征及生长特性,通过免疫细胞化学染色等技术和方法,检测胰腺干细胞特异性标志-Nestin,对胰腺组织中的胰腺干样细胞进行初步鉴定,并对其体外分化潜能进行观察。体外培养小鼠胚胎成纤维细胞,传至第三代后与丝裂霉素C作用,制成饲养层;在饲养层的培养条件下进行胰腺干样细胞的传代培养。 结果:采用Percoll不连续密度梯度离心和进行细胞来源检测后显示,胰腺内分泌部细胞集中在第一、二密度界面,胰腺外分泌部的细胞分布在第三密度界面。体外培养观察发现,从胰腺内、外分泌部获取的胰腺组织细胞,均存在一类大、圆、单个核的细胞,呈附壁生长,具有较活跃的分裂增殖能力,碱性磷酸酶染色呈阳性,表达胰腺干细胞的特异性标志-巢蛋白(Nestin);在无饲养层条件下,随着体外培养时间的延长,来源于胰腺内分泌部的部分胰腺干样细胞表达PDX-1,呈现向胰腺内分泌部β-细胞分化的趋势;来源于胰腺外分泌部的部分胰腺干样细胞表达胰腺导管上皮细胞特异性标志CK-19,呈现向胰腺外分泌部导管上皮细胞分化的趋势。在饲养层的培养条件下,胰腺干样细胞能连续传至第三代,均保持未分化状态和旺盛的增殖能力。
[Abstract]:Objective: to isolate pancreatic stem cells from the pancreatic tissue of newborn Kunming mice, culture in vitro, observe their morphological and biological characteristics, and identify them preliminarily. Under the condition of embryo fibroblast as feeder layer, the pancreatic dry like cells with high uniformity and enrichment were obtained. Methods: pancreatic tissues of new SPF Kunming mice were digested with type 鈪，

本文编号：2084203