基于聚乙烯二氨基三嗪的氢键型转基因载体

发布时间：2018-07-10 00:21

  本文选题：聚乙烯二氨基三嗪 + 氢键　； 参考：《天津大学》2007年硕士论文

【摘要】： 本工作研制出一种新型的通过氢键作用于DNA碱基对以达到复合DNA目的非病毒载体。以自由基无规聚合的方式制备了聚乙烯二氨基三嗪(PVDT)及其与乙烯基吡咯烷酮(VP)的共聚物,并精制出水溶部分。琼脂糖凝胶电泳显示PVDT基聚合物可有效复合DNA,并通过氢键作用使DNA缩合成密实状态,有效置换溴化乙锭(EB)。随着DNA的复合,圆二色谱(CD)发现DNA构象由B型向C型转变,并出现psi型谱线,可能缘于DNA高级结构的改变(长程手性结构)。透射电镜(TEM)下,被PVDT基聚合物缩合的DNA呈现球状、环状或大的聚集体,类似于阳离子载体缩合DNA的形态。以荧光素酶和增强的绿色荧光蛋白报告基因研究PVDT基载体对非洲猴肾(COS-1)细胞的转染,结果表明PVDT基载体具有满意的转染效率,比商品化ExGen 500有着更高的转染活性和更低的细胞毒性。PVDT基载体可有效保护DNA免受DNase I的酶解,复合物在牛血清蛋白(BSA)下仍具有高的稳定性。鉴于这些特点,PVDT基载体优于传统阳离子载体,并有望用于体内转基因应用中。
[Abstract]:In this work, a novel non-viral vector was developed to compound DNA base pairs by hydrogen bonding. Polyethylene diamintriazine (PVDT) and its copolymers with vinyl pyrrolidone (VP) were prepared by free radical random polymerization. Agarose gel electrophoresis showed that PVDT-based polymer could effectively compound DNA, and the DNA was condensed into dense state by hydrogen bonding, and ethidium bromide (EB) was effectively replaced. With the combination of DNA, circular dichroism (CD) showed that the conformation of psi changed from type B to type C, and the spectral line of psi appeared, which may be due to the change of higher structure of DNA (long range chiral structure). Under transmission electron microscopy (TEM), the DNA condensed by PVDT-based polymers showed spherical, circular or large aggregates, similar to the condensation of DNA by cationic carriers. Luciferase and enhanced green fluorescent protein reporter gene were used to study the transfection of African monkey kidney (COS-1) cells by PVDT base vector. The results showed that PVDT base vector had a satisfactory transfection efficiency. Compared with commercial ExGen 500, it has higher transfection activity and lower cytotoxicity. PVDT base vector can effectively protect DNA from DNase I hydrolysis, and the complex still has high stability under bovine serum protein (BSA). In view of these characteristics, PVDT base vector is superior to traditional cationic vector, and it is expected to be used in transgenic applications in vivo.
【学位授予单位】：天津大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R346

【共引文献】

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本文编号：2111286