脊髓源性神经干细胞培养及体外诱导分化实验研究

发布时间：2018-07-28 16:20

【摘要】：脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)是临床常见的创伤。外伤性的脊髓损伤危害严重，常导致四肢截瘫甚至更严重的后果，，神经干细胞的发现为脊髓损伤患者带来了希望，也坚定了战胜这一疾病的信心。本研究着眼于脊髓源性神经干细胞的培养、增殖及分化，为将来的自体移植提供了来源方便可靠的种子细胞，为进一步细胞移植治疗SCI打下了一定的实验基础。 实验一 为探讨胚胎大鼠脊髓神经干细胞的分离培养及体外诱导分化的特点和规律，我们利用显微解剖、无血清细胞培养技术在E12 SD大鼠的胎鼠脊髓中分离出具有单细胞克隆能力的细胞，并进行传代培养。同时观察白血病抑制因子(LIF)对培养的脊髓源性神经干细胞增殖和分化的影响。采用细胞免疫化学荧光方法进行分化细胞类型鉴定，并计算各分化细胞的比例。结果证实： 1．从E12天SD大鼠胚胎脊髓中成功分离出的神经干细胞具有连续克隆能力，在表皮生长因子(EGF)，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的作用下，脊髓源性NSCs快速增殖，形成多细胞组成的细胞球，将这些细胞球分离成单细胞重新培养，单个的细胞又很快变成细胞球。这些细胞表达神经巢蛋白抗原。
[Abstract]:Spinal cord injury (spinal cord injura sci) is a common clinical trauma. Traumatic spinal cord injury is serious, often leading to paraplegia or even more serious consequences. The discovery of neural stem cells brings hope to patients with spinal cord injury, but also strengthens the confidence to overcome the disease. This study focused on the culture, proliferation and differentiation of spinal cord derived neural stem cells, which provided convenient and reliable seed cells for autologous transplantation in the future, and laid a certain experimental foundation for further cell transplantation in the treatment of SCI. In experiment one, we used microanatomy to investigate the characteristics and rules of isolation, culture and in vitro induction of neural stem cells from embryonic rat spinal cord. Serum-free cell culture was used to isolate single cell clone cells from fetal spinal cord of E12 SD rats. The effects of leukemia inhibitor (LIF) on the proliferation and differentiation of cultured spinal cord derived neural stem cells were also observed. The cell types of differentiated cells were identified by immunocytochemistry and the proportion of differentiated cells was calculated. The results showed that: 1. The neural stem cells isolated from the embryonic spinal cord of E12 day SD rats had the ability of continuous cloning. Under the action of epidermal growth factor (EGF),) basic fibroblast growth factor (bFGF), spinal cord derived NSCs proliferates rapidly and forms a cell ball composed of many cells. The cells are separated into single cell and recultured. A single cell quickly turns into a ball of cells. These cells express nestin antigens.
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R329

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本文编号：2150863