Per2-shRNA慢病毒构建及嘌呤霉素筛选Per2低表达的细胞株

发布时间：2019-01-26 11:54

【摘要】：目的构建人Period2(Per2)基因shRNA慢病毒。方法设计并合成3对特异性人Per2基因shRNA靶序列,构建到pENTRTM/U6(GV112)慢病毒载体中,包装慢病毒,用real-time PCR筛选取最佳片段。对感染的U343细胞,经嘌呤霉素初步筛选,Western blot鉴定Per2蛋白表达,得到Per2低表达的细胞。结果成功构建了具有Per2沉默效应的shRNA慢病毒。结论此次包装的慢病毒可以成功抑制Per2基因在胶质瘤U343细胞中的表达,并可用嘌呤霉素筛选低表达细胞株。
[Abstract]:Objective to construct human Period2 (Per2) gene shRNA lentivirus. Methods three pairs of specific shRNA target sequences of human Per2 gene were designed and synthesized and constructed into pENTRTM/U6 (GV112) lentivirus vector. The lentivirus was packaged and the best fragment was screened by real-time PCR. The expression of Per2 protein was identified by purine mycin (, Western blot) screening in infected U343 cells, and the cells with low Per2 expression were obtained. Results shRNA lentivirus with Per2 silencing effect was successfully constructed. Conclusion the packaged lentivirus can successfully inhibit the expression of Per2 gene in U343 glioma cells, and purine mycin can be used to screen low expression cell lines.
【作者单位】： 宁夏医科大学;宁夏医科大学总医院神经外科;
【基金】：国家自然科学基金(81160313)
【分类号】：R373;Q78

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：2415453