人类锌指蛋白家族新基因ZNF641和突触小泡蛋白类似新基因hSVOP的克隆与功能研究

发布时间：2019-07-11 06:17

【摘要】：转录因子在多种细胞功能中担任了重要角色,包括细胞生长、增殖、调亡和细胞内的信号转导。人们已经鉴定了几个大的转录因子家族。在哺乳动物中,锌指蛋白是最庞大的家族。研究表明,锌指因子能调节多种在心脏表达的基因。为了研究与心脏发育和心脏疾病相关的基因,我们从人类胚胎心脏cDNA文库中分离并鉴定了一个新的锌指基因,经国际基因命名委员会批准命名为ZNF641。ZNF641定位在染色体12q13.11区带,含一个KRAB-A框和5个C_2H_2型锌指。其cDNA全长4906个碱基,含一个1317碱基的开放阅读框,编码一个由438个氨基酸组成,分子量为49.5 kDa的蛋白。Northern杂交分析表明ZNF641在成人组织中广泛表达,其中,在骨骼肌组织有高度表达,在心脏、肝脏和胰腺中有中度表达,在大脑,肾脏和肺中没有表达。通过构建增强型绿色荧光蛋白与ZNF641融合基因的真核表达载体,转染COS-7细胞系,瞬时表达后用荧光显微镜观察ZNF641融合蛋白的活细胞定位及表达,证明ZNF641蛋白在细胞核和细胞质中均有表达。报告基因分析证明ZNF641是一个转录激活因子,结构域分段分析表明ZNF641的KRAB-A框和C_2H_2锌指之间的连接部分(linker)是其转录激活的关键序列,可能是一个新的转录激活子。ZNF641在COS-7细胞中过表达能激活转录因子AP-1与SRE的活性,这两种因子是MAPK信号途径介导的重要因子,说明ZNF641蛋白可能在MAPK信号途径中作为激活因子介导细胞功能。综合该基因的结构和表达特征,我们初步得出结论认为:ZNF641是参与多种人类胚胎器官发生
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图片说明： 设计PCR反应引物获得该基因的开放阅读框(O盯)后，在其5’端设计一个嵌套5，RACEPCR的引物进行5，RACE扩增，，结果获得一个长度约为560bp的PCR产物【图2一11。另外，在其3’端设计一个嵌套3，RACEPCR的引物进行了3，RACE扩增，结果获得一个长度约为400bp的pCR产物[图2一1]。经纯化，pMD18一T载体连接，图2一1NZF6415气ARCE一pcR和3、以eE一pCR扩增结果.其中1号泳道为56obp的5’一ARcE一PcR产物纯化结果;2号泳道为400Pb的3’一ARCE一PCR产物纯化结果;3号泳道为marker。转化，测序，从而获得完整的基因cDNA序列。该基因全长为4906bp
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图片说明： 获得GeBnnak编号为AY842285。此基因共编码438个氨基酸，蛋白质大小约4.95kD。起始密码子开始于717，终止密码子位于2033，其核昔酸和蛋白质序列见图2一ZA。据SMARI，程序分析，此基因编码的蛋白质在氮末端有1个KRAB框，在碳末端有5个连续的锌指【图2一ZB]，搜索坦必鲍丝塑迷达璧丛创匕可知该基因定位于染色体12q3l.ll的位置，;跨基因组约.10.45kb，属于锌指蛋白家族KRABC/2践亚家族的成员。根据核昔酸和蛋白质的特征，经国际基因命名委员会批准，命名为刀W巧甲I。表2一卜NZF641基因的基因组结构助nan
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R346

【引证文献】

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1 邢丹;喹赛多相关锌指蛋白的表达调控与其调节基因的研究[D];华中农业大学;2012年

本文编号：2512934