鼠抗人IgG单克隆抗体的研制及其在结核抗体IgG检测中的应用

发布时间：2019-07-17 08:05

【摘要】：目的:通过杂交瘤技术,制备出鼠抗人IgG单克隆抗体,并将其运用到结核抗体IgG检测试纸条中,研制出能快速灵敏的检测出结核抗体IgG的检测试纸条。方法:用人IgG作为抗原免疫Balb/c小白鼠,经四次免疫后,测Balb/c小白鼠的血清效价。取效价最高的一只用其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,促融剂为分子量为1000的PEG。用间接ELISA方法检测出阳性杂交瘤细胞株,用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行亚克隆,亚类鉴定用试剂盒进行鉴定,用间接ELISA法测定抗体腹水效价。用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,并制备了稳定的金标记1E1抗体,将其浸膜后装备成试纸条。结果:用杂交瘤技术制备出了十一株能稳定分泌抗人IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5A8、3C10、5E3、1E1、1D1、1E2、1E3、1G3、2D2、1C12、5B11。亚类鉴定结果为:5A8、5E3、5B11、1D1、1E2、1E3、1G3、3C10均为IgG1,1E1为IgG2a,2D2为IgG2b,1C12为IgM。染色体计数结果为96-107,染色体计数分析均为Ba1b/c小白鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞的杂交瘤细胞。取其中四株腹水效价达到3.9×10~(-7)的5A8、3C10、5E3、1E1进行亲和力测定,亲和力系数均达到10~7。用盐析法进行粗提后,用凝胶过滤法进行进一步的纯化并用SDS-PAGE电泳鉴定纯化结果。用这四株纯化的抗体进行胶体金标记,只有1E1金标记抗体能稳定。将金标记1E1抗体浸无纺布,用重组结核抗原标记检测线,以羊抗鼠IgG抗体标记控制线,制备出检测结核抗体IgG的检测试纸条。检测含有结核抗体IgG的阳性溶液和生理盐水等阴性溶液,实验结果良好。结论:本研究制备出了十一株鼠抗人IgG单克隆抗体,并且初步研制出了检测结核抗体IgG的免疫层析试纸条。为结核病的检测和预防做了非常有意义的尝试。
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图片说明：经免疫后的Balb/c小白鼠的脾细胞和提前扩大培养的Balb/c小白鼠SPZ/0骨髓瘤细胞用PEG1000融合后，，经过选择性培养基HAT培养液的选择性培养，融合后在电子显微镜下观察，在第d3开始出现融合细胞克隆(如图1)。融合的六板576孔均有杂交瘤细胞克隆生长，融合率为100%。经两次间接EUSA方法检测，有40孔杂交瘤细胞生长孔上清内的抗体反应表现阳性。选择其中OD值较大的15孔杂交瘤细胞系进行克隆培养(如图2)。再经过3一5次亚克隆，直至阳性克隆率达到100%。获得十一株稳定分泌抗体的单克隆杂交瘤细胞株十一株，分别命名为:3C10、5E3、5Bll、IDI、IEZ、IE3、IG3、IEI、5A8、2D2、IC12。图1:一个生长初期的杂交瘤细胞克隆口Zoox)Figl:OnehbyridomaeelleloneofinitialPhase(3200x)图2:一个生长后期的杂交瘤细胞克隆口Zoox)FigZ:OnehybridomaeellcloneoflatePhase(32X()x)
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图片说明：杂交瘤细胞克隆生长，融合率为100%。经两次间接EUSA方法检测，有40孔杂交瘤细胞生长孔上清内的抗体反应表现阳性。选择其中OD值较大的15孔杂交瘤细胞系进行克隆培养(如图2)。再经过3一5次亚克隆，直至阳性克隆率达到100%。获得十一株稳定分泌抗体的单克隆杂交瘤细胞株十一株，分别命名为:3C10、5E3、5Bll、IDI、IEZ、IE3、IG3、IEI、5A8、2D2、IC12。图1:一个生长初期的杂交瘤细胞克隆口Zoox)Figl:OnehbyridomaeelleloneofinitialPhase(3200x)图2:一个生长后期的杂交瘤细胞克隆口Zoox)FigZ:OnehybridomaeellcloneoflatePhase(32X()x)
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R392

【参考文献】