近交系胎鼠中脑前体细胞的体外培养以及骨髓基质细胞对其营养作用的初步研究

发布时间：2019-08-16 12:28

【摘要】：第一部分 近交系大鼠胚胎中脑前体细胞体外培养研究 目的：体外培养近交系大鼠胚胎腹侧中脑前体细胞(ventral mesencephalic precursor，VMP)并诱导分化为多巴胺能神经元(dopaminergic neuron，DN)，为进一步研究DN定向分化的分子机制奠定基础。 方法：取材胎龄11天(E11)的近交系大鼠胚胎VMP，体外用含碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)的无血清培养液扩增培养7天，然后换用含L-抗坏血酸-2-磷酸酯倍半镁盐(L-Ascorbic acid-2-phosphate sesquimagnesium salt，AA-2P)的特殊培养液诱导分化7天，倒置显微镜下观察细胞形态变化，并绘制生长曲线。分别以TH(酪氨酸羟化酶)、β-Tubulin(微管蛋白)、Nestin(巢蛋白)、GFAP(神经胶质纤维酸性蛋白)抗体标记DN、神经元、前体细胞、星型胶质细胞，，鉴定VMP分化情况，流式细胞仪检测分化细胞中的TH阳性细胞比例。 结果：近交系大鼠胚胎VMP在体外培养时能快速扩增并分化，培养14天后细胞总数扩增至培养前49.76±6.34倍，免疫荧光染色显示β-Tubulin Ⅲ阳性的神经元中(71.33±20.42)％为TH阳性的DN，后者占细胞总数的(24.85±12.85)％。细胞体系中还包括一些前体细胞和星形胶质细胞等。流式细胞仪检测显示TH阳性神经元数占神经元总数的75.45％。 结论：近交系大鼠胚胎VMP在合适的体外培养条件下能够快速增殖，经诱导能定向分化为较高比例的DN，可以作为深入研究DN定向分化分子机制的细胞模型。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R329.2

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本文编号：2527436