抗汉滩病毒NP和GP双特异性抗体的构建及其在昆虫细胞中的表达

发布时间：2019-08-16 18:39

【摘要】：肾综合征出血热(HFRS)是一种由汉坦病毒引起的危害极大的急性病毒性传染病,临床上以发热、出血和急性肾功能损害为主要特征。该病在我国危害尤为严重,目前年发病人数为5～10万人,病死率较高。目前尚无特异有效的治疗方法。 鼠源性单克隆抗体(mAb)在病毒性疾病的治疗上已有应用,但由于存在人抗鼠抗体(HAMA)应答,不仅可能会影响其治疗效果,甚至会引起严重的变态反应。因此,如何降低鼠源性mAb的免疫原性成为当前研究的重要课题。小分子抗体是通过基因工程技术发展起来的一种很有应用前景的新一代抗体。通过基因工程技术改造形成的小分子抗体可以保持亲本抗体的免疫学活性,且具有免疫原性弱,穿透力强等优点。因此,用基因工程方法制备小分子抗体并尽量减少其免疫原性是克服鼠源性mAb缺点的有效方法之一。 本研究用我室制备的具有高中和活性和高保护性的鼠源性抗汉滩病毒(HTNV)G2糖蛋白mAb 3G1和抗HTNV核蛋白(NP)mAb 1A8的基因构建双特异性抗体表达载体,分别在大肠杆菌及昆虫细胞中进行表达,并鉴定其免疫学活性,为开发新一代特异性治疗HFRS的药物奠定
【图文】：

为IASVH基因，即构建成重组质粒IASVH一3GIV口pComb3E。用Ncol和助el双酶切鉴定，，可切出70Obp的片段，Pstl单酶切鉴定，可切出约1.SKb及约300Pb的片段，均与预期结果相符(图9)。将3GI的VH基因克隆入IAS一SeFv一C汀pUC18，即可构建3GIVH一IASVL一CK异源抗体ScFv基因，VL基因后连接CK基因用于检测表达抗体的活性。将3GIVH一IA8vL一C‘基因克隆入pLpGEM7后，可加上表达所需的brs、前导肤基因序列和合适的克隆位点等，再克隆入IASVH一3GIVLP/Comb3E，恢复了pComb3表达轻链的框架，即构建成双特异性抗体表达载体scFv一sFcv’P/Comb3。再用PSol和Nhol酶切，除去噬菌体衣壳蛋白基因m

可切出约800多bp的片段;用肠口I单酶切鉴定，可切出800多bp及约300多bp的片段;用EcoR卜几肠al双酶切鉴定，可切出约1.IKb的片段，均与预期结果相符(图10)。图9重组质粒IA8vH一3GlvLP/comb3E的限制性内切酶酶切分析
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R392

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 王立良;杆状病毒载体的研究进展[J];国外医学(分子生物学分册);1998年05期

2 卫立辛,汪美先,徐志凯,汪力亚;单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳鼠保护作用的研究[J];细胞与分子免疫学杂志;1989年02期

本文编号：2527592