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人Lamda3和Epsilon 干扰素基因的克

发布时间:2019-08-29 09:53
【摘要】:目的:克隆新发现的人Lamda3和Epsilon干扰素基因。目前对这两个干扰素的研究很少,因此我们通过RT-PCR获得这两个干扰素的全长cDNA,并重组到真核表达载体,转染真核细胞,在真核系统中进行重组表达并检测表达蛋白的生物学活性。 方法:分别从病毒或细胞因子刺激的细胞中抽提总RNA,通过RT-PCR获得人干扰素lamda3(hIFN-λ3)和epsilon (hIFN-ε)基因。将其重组到pcDNA3.1/myc-his(-)A真核表达质粒,经测序鉴定后,将构建的重组质粒pcDNA3.1 A-hIFN-λ3和pcDNA3.1 A-hIFN-ε分别导入真核细胞COS-7或CHO细胞进行瞬时或稳定表达,研究表达产物的功能及生物学活性。 结果:通过PCR、酶切鉴定和测序证明成功的获得了603bp的人hIFN-λ3和627bp的人hIFN-ε基因,且序列测定结果与GenBank报道的完全一致,真核重组表达质粒构建正确。结果显示hIFN-λ3和hIFN-ε基因不仅可在COS-7或CHO细胞中表达,而且表达的rhIFN-λ3蛋白具有抗病毒活性;rhIFN-ε蛋白不仅具有抗病毒活性,还具有抗增殖活性,其抗病毒分子机理可能与诱导细胞产生MxA抗病毒蛋白有关,为今后干扰素的基因重组药物研制奠定了基础。 结论:我们成功的获得了hIFN-λ3和hIFN-ε基因,并在真核细胞中得
【图文】:

人Lamda3和Epsilon 干扰素基因的克


一l转化平板鉴定:,,、

干扰素基因,重组质粒,片段,感受态


和EPsilno干扰素基因的克隆、表达及活性鉴定第一部分一条约600bp的亮带,同预计的目的基因片段大小相一致(图1一2)。图1一2hINF一人3-TRPcR扩增特异片段结果Fig.l一2Rl’-PCRProduetofhINF一入3cDNArfagmentl:hINF一入3rfagmnetM:DNAmarker:100bPladder2.2重组质粒的酶切鉴定和PRc鉴定将扩增的目的基因纯化后与真核表达载体PcNDA3.1m/yc一his(一)A定向连接,转化感受态DHS。受体菌后,挑取菌落,,抽质粒,通过Eoc班、Bamfn双酶切及PCR鉴定均可得到约60Obp的目的DNA条带,说明基因组装方向正确,基因片段大小与预期一致,该片段可能是hIF-N人3基因(如图一3,l一4)。图l一3重组质粒沐洲A3.IA扣NF·入3的双酶切鉴定Figl一3Resrti画onna目ysisof伴DNA3.IA.h]l刑.人3.M.ONAst田ld.劝m耐ker(D以,加O)1拼洲A3.IA一址NF一入3digesetdbyEc0RlndaB别”】112书洲A3.AIdig酬曰by枷RlnadBmal习图l一4彭顺粒体侧A3JA一NF一人3的此R鉴定Figl健咒Rinde石石。山onof详ND月.IA七FIN.人3M.DNAs细ld匆心浏吐。(DUl0(X))P此Riden的。币。nofpeNDA3.IA扣FN·入3
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R346

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本文编号:2530452

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