大鼠血管平滑肌增殖器官和细胞模型的建立

发布时间：2019-11-27 15:10

【摘要】： 研究目的:为了建立血管平滑肌增殖模型,通过体外培养大鼠主动脉和用体外培养血管再传代培养血管平滑肌细胞(Vascular Smooth Muscle Cell,VSMC)方法,采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Bromodeoxyuridine, 5-BrdU)标记增殖细胞并检测与血管平滑肌细胞增殖和表型转化相关的基因高血压相关基因-1(Hypertension-Related Gene-1,HRG-1)和平滑肌22α(Smooth Muscle 22 alpha ,SM22α),探讨一种较为理想的血管平滑肌增殖的器官和细胞模型,为血管平滑肌增殖性疾病的研究提供一个实验平台。 实验方法:器官模型用成年雄性SD大鼠19只,体重150-200g,用水合氯醛麻醉动物,取主动脉放入Hanks液中去除周围多余的脂肪组织和外周组织,剪成1.5cm左右小段,用竹签损伤内皮,分成培养5天、8天和13天3个实验组,在含20%胎牛血清DMEM培养基中培养,2-3天半量换液一次。正常对照组用未培养的血管,收集血管前24小时用BrdU标记。细胞模型用体外培养8天的血管和正常未培养的血管,用贴块法分别培养平滑肌细胞。用第3-4代细胞做实验,在收集细胞前24小时用BrdU标记。以上实验用HE染色和抗5-BrdU免疫细胞化学染色观察细胞增殖,用透射电镜观察血管平滑肌细胞的亚细胞结构变化;RT-PCR检测与血管平滑肌增殖相关基因HRG-1和表型标志基因SM22α的表达。 结果:器官模型:体外培养5天、8天、13天的大鼠主动脉用HE染色可见到不同程度的平滑肌细胞增生,第13天组的血管有明显斑块形成,突向管腔。BrdU标记的免疫细胞化学结果进一步表明:体外培养的主动脉血管可见标记的增殖平滑肌细胞,且随着培养天数增多标记细胞也增多,透射电镜观察到体外培养8天的血管平滑肌细胞与对照组相比,胞浆中肌丝减少,内质网明显增多,并可见大量的分泌小泡。RT-PCR结果表明正常血管平滑肌都表达HRG-1和SM22αmRNA,随体外培养时间延长表达逐渐减少,至培养第13天基本完全消失。提示:体外培养血管可使平滑肌表型从收缩型向分泌型转化,并有平滑肌增殖。细胞模型:用体外先培养8天的血管传代培养的平滑肌与正常血管(未培养)传代培养的平滑肌细胞相比,BrdU标记增生细胞明显增多,RT-PCR结果显示:正常血管传代培养的平滑肌HRG-1和SM22αmRNA均有表达,而体外先培养8天后血管再传代
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R-332

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本文编号：2566658