bFGF在人骨髓MSCs向脂肪分化过程中对PPAR-γ2表达的影响

发布时间：2019-11-27 22:32

【摘要】： 目的:观察人碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)在人间充质干细胞(Human mesenchymal stem cells,hMSCs)向脂肪细胞方向分化过程中,对人过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(Peroxisome proliferator-activated receptor-γ2,PPAR-γ2)表达的影响。 方法:全骨髓培养法培养人骨髓hMSCs,培养至第四代,按增殖期及分化期是否加入了bFGF 4ng/mL和脂肪诱导剂(罗格列酮5μmol/L+胰岛素10μg/mL),将细胞分为6组,并在诱导分化前1d、分化第3d以RT-PCR检测PPAR-γ2和葡萄糖转运蛋白4(Glucose transporter 4,GLUT4)mRNA的表达情况,诱导分化第28d时通过油红O染色及透射电镜观察细胞分化程度,并进行统计学分析。 结果:hMSCs在未诱导情况下不表达PPAR-γ2,在脂肪诱导剂的作用下表达PPAR-γ2,在bFGF作用下在诱导前就已表达PPAR-γ2;通过油红O染色和透射电镜观察hMSCs经脂肪诱导剂诱导分化后胞浆内形成大量脂滴。 结论:bFGF能促进人骨髓hMSCs向脂肪分化过程中PPAR-γ2的表达,能促进人骨髓hMSCs向脂肪细胞方向的分化。
【图文】：

s 形态学观察髓培养法获取的骨髓细胞体外培养 24h 后倒置显微镜下可见态不规则；2～3d 倒置显微镜下可见部分细胞贴壁，贴壁的呈圆形、椭圆形、多角形、梭形；5～7d 左右呈“集落”样生迅速，低倍视野下见细胞呈放射状、旋涡状向外扩展；14d 左右培养液清亮，悬浮细胞已全部清除；传代 24 小时后细胞完全，3～5d 天即可达 80～90%融合，贴壁细胞表现为均一、略成形细胞，折光性好，增殖旺盛，保持旋涡状生长方式，见图 1至第三代，流式细胞学检测结果：CD34、CD45 均为阴性，表现见图 2。证明所培养的骨髓细胞已经纯化为比较单一的 hMSC

图 2 hMSCs 经 CD45、CD34 抗体标记后流式细胞图Fig 2 hMSCs with CD45、CD34 antibody in flow cytometry图注：流式细胞图横坐标 SS 为侧向角散射光强度，纵坐标 FS 为前向角散射光强度，PE-CD45为藻红蛋白荧光素标记抗体，，FITC-CD34 为异硫氰酸荧光素标记抗体。3.2 RT-PCRPPAR-γ2mRNA 表达情况：3 组分化前无 PPAR-γ2 表达，4 组在分化前已经有 PPAR-γ2 的表达；分化第 3d，3 组和 4 组均有 PPAR-γ2mRNA 的表达，且二者的表达差异有统计学意义，p<0.05，4 组较 3 组的表达明显增强。GLUT4mRNA 表达情况：分化第 3d，3 组和 4 组细胞均有 GLUT4 表达，且二者的表达差异有统计学意义，4 组较 3 组表达明显增强。具体见表 2 和图 3。表 2 PPAR-γ2 和 GLUT4 与 18smRNA 的 OD 值之比（n=6， x±S）
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R329.2

【参考文献】

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1 张翼澾,达万明;骨髓增生异常综合征患者间充质干细胞的生物学特性及其支持造血的体外研究[J];中国实验血液学杂志;2005年05期

本文编号：2566787