碘对体外培养血管内皮细胞功能的影响

发布时间：2019-12-02 21:59

【摘要】：【目的】 本实验通过综合运用体外细胞培养技术、细胞免疫组化技术、流氏细胞仪技术及相关生化指标检测等多种方法初次研究碘浓度高低对体外培养的血管内皮细胞生长与功能的影响；观察不同碘浓度在相同时间段对血管内皮细胞的影响，为探讨微量元素碘对人体的影响与作用提供有效的实验支持，丰富对碘的实验研究。 【材料与方法】 1、细胞培养：以含有10％胎牛血清的DMEM培养基常规培养ECV304内皮细胞株，传代待细胞生长状态稳定后进行各项实验。 2、制备单细胞悬液密度为0.8～1.0×10~5／ml，种24孔板，待细胞贴壁后加入不同浓度的碘化钾，每板均设对照组，于4、8、12、24、48小时时观察细胞生长状况。 3、MTT实验，检测细胞增殖情况。在碘处理后的96孔细胞培养板中每孔添加MTT试剂20μl(5mg／ml)，37℃孵育4h、8h、12h、24h及48h后终止培养，，小心弃去培养液，用胰酶消化细胞，每孔加入150μl二甲基亚砜(DMSO)溶解，振荡10min。用酶标分析仪在490nm波长下测其光吸收值(OD)，可间接反映细胞数量。 4、细胞免疫组化：将消毒好的盖玻片放入24孔培养板，种细胞，贴壁后加入实验因素，培养12h及24h后终止。除去培养基，PBS冲洗，滴加一抗二抗，显色前用镊子小心将盖片取出进行DAB显色，观察PCNA的表达。 5、流式细胞仪技术：待测细胞经离心—PBS冲洗—吹匀—固定—再离心—冲洗—吹打—染色(4℃，20-30分钟)后，400目尼龙网过滤后上机检测。Cell quest分析软件分析，用细胞分裂增殖指数(PI)表示相对增殖力。PI=(S+G_2／M)／(G_0／G_1+S+G_2／M)。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R363.1

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