人类蜕膜NK细胞特性研究

发布时间：2020-02-14 13:50

【摘要】： 研究背景: 妊娠至今依然是困惑免疫学家的未解之谜。胚胎作为半同种移植物不被母体免疫系统排斥,受多种因素影响,其中子宫内膜局部免疫因素起着重要的调节作用。研究发现在滋养层细胞侵入点有许多免疫细胞围绕其周围,然而,尽管它们有着潜在的细胞毒作用,但在正常妊娠时并没有造成对滋养细胞的杀伤。人们通过对蜕膜内NK细胞的性状研究,发现其明显不同于外周血NK细胞,是一群独特型的淋巴细胞群,因此将蜕膜中NK细胞命名蜕膜NK细胞,简称dNK细胞。dNK细胞从子宫内膜分泌期开始增加并于孕早期达到高峰(约占蜕膜淋巴细胞70%左右),且与绒毛外细胞滋养细胞紧密接触,此后随着妊娠的发展又逐渐下降,到晚孕时占蜕膜淋巴细胞35%左右。dNK细胞在整个妊娠期间的动态变化过程提示其可能在受精卵的种植过程和胎盘生长发育中起重要作用。近年来关于dNK细胞的来源、表型、功能及其与滋养细胞的相互识别关系已成为生殖免疫研究的热点之一。 dNK细胞主要分布于母体与胚胎接触的蜕膜,是母体直接识别胎儿抗原的免疫细胞,它的独特的表型及功能不但能维持母胎界面的免疫耐受,还能分泌一系列细胞因子促进蜕膜血管重建及Th1/ Th2平衡网络的维持。若dNK细胞的数量及功能失调则可能诱发病理妊娠。研究蜕膜组织中NK细胞的功能状态与妊娠的关系,无疑从一个全新的角度诠释妊娠这一生理现象,也为揭示病理性妊娠的发生机制及最终有效防治提供新思路,并为生殖免疫的发展提供了新的理论依据。目的: 检测蜕膜中NK细胞(dNK细胞)的分布状态,以及其与外周血中NK细胞(pNK细胞)在含量、表型、Th1/Th2型细胞因子表达、杀伤功能方面的变化,探讨蜕膜NK细胞独特的表型、功能及其与滋养细胞的相互识别关系与母胎界面免疫耐受之间的重要联系。方法: 1)收取正常晚孕胎膜组织(6例),免疫组织化学法检测蜕膜中NK细胞的分布状态。 2)收集晚孕蜕膜组织及同一孕妇外周血(20例),机械研磨法联合密度梯度离心法分离出蜕膜单个核细胞,单纯密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞,流式细胞术检测晚孕蜕膜、外周血中NK细胞的含量及表面CD16, CD69, NKG2A和NKG2D的表达变化。 3)收集晚孕胎盘组织8例,RT-PCR技术检测胎盘滋养层中NKG2A的配体HLA-G, HLA-E和NKG2D的配体MICA mRNA的表达情况。 4)流式细胞术检测晚孕蜕膜及外周血中NK细胞内Th1/Th2型细胞因子IFN-γ和IL-4的表达。 5)免疫磁珠分选出蜕膜及外周血中NK细胞,流式细胞术检测其分离纯度,51Cr释放法分别测定不同效靶比NK细胞对其敏感性靶细胞K562的杀伤活性。结果: 1)蜕膜中的NK细胞有着特殊的分布状态,多数集中在蜕膜与滋养层交界的母胎界面处。 2)相对于pNK细胞,dNK细胞是蜕膜中的主群体淋巴细胞。 3)相对于pNK细胞,dNK细胞表面低表达CD16分子,高表达CD69分子。 4) dNK细胞高表达NKG2受体家族NKG2A和NKG2D,但在滋养层中只检测到NKG2A的配体HLA-G和HLA-E ,而未检测到NKG2D的配体MICA。 5) dNK细胞内Th1/ Th2型细胞因子IFN-γ和IL-4的表达均明显高于pNK细胞。 6)不同效靶比dNK细胞对其敏感性靶细胞K562的杀伤活性明显低于pNK细胞。结论: 蜕膜NK细胞作为重要的天然淋巴细胞,其含量、表型、Th1/Th2型细胞因子表达以及杀伤功能方面与外周血NK细胞有着明显差异,并且其与滋养细胞之间有着密切联系。蜕膜NK细胞独特的表型及功能在介导母胎界面免疫耐受中发挥了重要的作用。
【图文】：

蜕膜,NK细胞,免疫组化法,分布状态

学染色标记蜕膜中 NK 细胞的表达及分布状况CD56单克隆抗体标记蜕膜NK细胞，标本选取的为晚孕胎羊膜、滋养层与蜕膜三层结构，滋养层与蜕膜的交界处即蜕膜 NK 细胞主要分布在滋养层与蜕膜交界的母胎界面处（蜕膜中。400 倍放大后发现 CD56 主要表达于细胞膜上，

蜕膜,外周血,NK细胞,流式细胞术

式细胞术检测晚孕蜕膜及外周血中 NK 细胞的含量、表型变化膜及外周血中 NK 细胞分别占其淋巴细胞的百分含量式细胞术分别检测晚孕蜕膜 NK 细胞（dNK）及外周血中 NK 细胞（巴细胞的百分比，结果发现晚孕蜕膜中 NK 细胞占蜕膜淋巴细胞的2±5.9%，，明显高于外周血中 NK 细胞的比率(12.5±3.7%)。dNK 表面密度明显高于 pNK 细胞，在流式图上表现为荧光强度增强，如图
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R392

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