补肾祛痰活血汤对缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织的保护作用及其机制的研究

发布时间：2017-03-20 15:10

  本文关键词：补肾祛痰活血汤对缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织的保护作用及其机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨补肾祛痰活血汤对血脑屏障的保护作用。研究其对脑缺血再灌注损伤后脑组织HE染色细胞形态的影响,脑组织含水量及血脑屏障通透性的影响,咬合蛋白(occludin)、闭锁小带蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的改变。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、治疗组和对照组,每组10只。采用改良Zea Longa线栓法建立SD大鼠脑缺血再灌注损伤模型。补肾祛痰活血汤预处理治疗组,消栓通络胶囊预处理对照组,正常组、假手术组、模型组给与等体积蒸馏水灌胃。在造模3d前对各组给药物干预,造模后,对大鼠进行神经行为学评分,将1 3分的纳入实验。模型组2分的7只,3分的1只。治疗组2分的5只,3分的3只,对照组1分的1只,2分的7只。给药进行3d后,从尾静脉注射2%伊文氏蓝(EB),按0.2ml/100g体重注射,1h后断头取脑,多功能酶标仪测定脑组织中伊文氏蓝含量,比较脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性。取造模侧脑组织入多聚甲醛固定,入苏木素液染色,二甲苯透明中性树胶封片,干后镜下观察并显微采图,进行形态学比较。用免疫组织化学法测定损伤区ZO 1、Occludin蛋白的表达量,并对结果进行相关性分析。取出大鼠左侧前端大脑皮质,用电子天平称其湿重后,置于60℃烤箱中烤干24h至恒重。脑组织含水量测定:含水量=(湿重—干重)÷湿重×100%。摘除右侧眼球,静脉取血3ml,30min内室温条件下置于离心机于以1500r/min,离心15min,取上清液,置于 80℃冰箱备检,采用ELISA法测定脑缺血再灌注损伤大鼠VEGF水平,研究药物对血脑屏障通透性的干预作用。结果:伊文氏蓝(EB)在正常组、假手术组、模型组、治疗组和对照组中脑组织浓度有显著差异(P0.01)。预处理治疗组浓度低于对照组,模型组浓度最高,正常组浓度最低。预处理治疗组、对照组各组脑含水量较模型组明显减低,预处理治疗组低于对照组,正常组与假手术组没有明显差异(P0.01)。HE染色:左侧大脑海马C2区,正常组与假手术组胞核成圆行,核质分布均匀,核仁明显,清晰圆润。模型组胞核固缩,塌陷,核质不清晰,部分细胞坏死消失,胶质细胞增生,较其他组坏死比例明显增加,治疗组较对照组坏死细胞减少。模型组损伤脑组织区域ZO 1、Occludin蛋白表达明显降低(P0.01),治疗组高于对照组,对照组高于模型组。VEGF在正常组、假手术组、模型组、治疗组和对照组中脑组织浓度有显著差异(P0.01),治疗组高于对照组,模型组浓度高于正常组,治疗组VEGF浓度最高。结论:补肾祛痰活血汤能够减轻SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤导致的脑组织水肿,对损伤区域ZO 1、Occludin蛋白含量降低有抑制作用,能减少脑组织细胞坏死,减轻血脑屏障破坏导致的通透性增加,影响血液内皮生长因子[VEGF]蛋白表达,促进脑缺血区的血管增生,改善该区域微循环的血流供应,减少梗死面积,抑制血脑屏障通透性增高,减轻脑水肿形成,对血脑屏障具有一定的保护作用。
【关键词】：补肾祛痰活血汤 含水量 HE染色 VEGF ZO-1 Occludin 实验研究
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5;R-332
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 中英文缩略对照表13-14
• 前言14-16
• 材料与方法16-24
• 1、实验材料16-18
• 1.1 实验动物16
• 1.2 主要仪器16-17
• 1.3 主要试剂17-18
• 2、实验方法18-24
• 2.1 实验分组18
• 2.2 实验方案18-23
• 2.2.1 缺血性脑卒中模型制作18-19
• 2.2.2 评分标准19
• 2.2.3 模型成功的判断标准19
• 2.2.4 EB通透性测定19-20
• 2.2.5 脑水肿程度测定20-21
• 2.2.6 HE染色21
• 2.2.7 VEGF检测21-22
• 2.2.7.1 VEGF样品采集21
• 2.2.7.2 VEGF实验检测主要步骤21-22
• 2.2.8 免疫组化22-23
• 2.2.8.1 免疫组化法测定Occludin浓度步骤22-23
• 2.2.8.2 免疫组化法测定ZO 123
• 2.3 统计方法23-24
• 实验结果24-28
• 1.1 EB 的含量24
• 1.2 脑组织含水量24-25
• 1.3 HE染色结果25
• 1.4 VEGF实验结果25-26
• 1.5 Occludin实验结果26-27
• 1.6 ZO 1 实验结果27-28
• 讨论28-33
• 结论33-34
• 参考文献34-40
• 结语40-41
• 综述41-62
• 参考文献54-62
• 致谢62-64
• 在校期间的主持课题、撰写的书籍及发表的论文64-65

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