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原代大鼠边缘群肝细胞的分离及端粒酶活性分析

发布时间:2020-02-16 05:21
【摘要】:目的:通过检测端粒酶活性(TMA)在原代大鼠边缘群及非边缘群肝细胞中表达差异,探讨边缘群细胞是否具有肝脏干细胞的部分特征.方法:原位两步胶原酶法分离大鼠肝细胞.应用流式荧光激活细胞分选术(FACS)将肝细胞分成边缘群(SP)及非边缘群(Non-SP),并定量分析两群细胞中TMA水平.结果:存在SP细胞并占细胞总体2.1%,SP细胞TMA高于Non-SP细胞(28.1±1.3vs2.0±0.2TPG,P0.01).结论:大鼠边缘群肝细胞具有更强的自我更新能力,即具有干细胞的部分特征.
【图文】:

散点图,二维图,流式细胞仪,二维


角(P3)另有小部分散点聚集(低Hoechst),而维拉帕米拮抗组无此区域,即SP细胞. SP占受检细胞的(2. 1±0. 2)% (图1).2.3 SP细胞及Non2SP细胞TMA检测 ①定量检测: SP细胞TMA为(28. 1±1. 3) TPG,Non2SP细胞TMA为(2. 0±0. 2) TPG. SP细胞TMA水平显著高于Non2SP细胞(t=50. 440,P<0. 01).②聚丙烯酰胺凝胶电泳: SP细胞电泳呈阳性,Non2SP细胞电泳呈阴性(图2).A:无维拉帕米组; B:加入维拉帕米组.图1 流式细胞仪二维散点图1: 1000个端粒酶阳性细胞对照; 2: SP细胞; 3: SP细胞热失活处理;4: Non-SP细胞; 5:端粒酶阴性对照.图2 SP及Non-SP细胞PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳3 讨论干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞,多种干细胞均表现出较强的端粒酶活性[2],而端粒酶对于维持干细胞的自我更新、多向分化潜能以及抗衰老均有重要意义[3].近年来研究发现,一些细胞对DNA结合染料Hoechst33342有特异性排出,结合FACS分析

聚丙烯酰胺凝胶电泳,细胞图,细胞,干细胞


于Non2SP细胞(t=50. 440,P<0. 01).②聚丙烯酰胺凝胶电泳: SP细胞电泳呈阳性,Non2SP细胞电泳呈阴性(图2).A:无维拉帕米组; B:加入维拉帕米组.图1 流式细胞仪二维散点图1: 1000个端粒酶阳性细胞对照; 2: SP细胞; 3: SP细胞热失活处理;4: Non-SP细胞; 5:端粒酶阴性对照.图2 SP及Non-SP细胞PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳3 讨论干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞,多种干细胞均表现出较强的端粒酶活性[2],而端粒酶对于维持干细胞的自我更新、多向分化潜能以及抗衰老均有重要意义[3].近年来研究发现,一些细胞对DNA结合染料Hoechst33342有特异性排出,结合FACS分析,可得到低荧光并表现为边缘性聚集的SP细胞,这已成为一种经典的分离造血干/祖细胞的方法[4-5],并在小鼠肺、皮肤、骨骼肌、乳腺、胰岛细胞及人类皮肤、角膜等组织的干细胞的分离中被成功应1022第四军医大学学报(J FourthMilMedUniv)2007

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本文编号:2580029

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