小鼠肝干细胞的分离培养及其生物学特性研究

发布时间：2020-03-25 12:01

【摘要】： 目前认为肝干细胞是体内存在的一种具有自我增殖能力和多向分化潜能的干细胞，可以分化为肝细胞和胆管上皮细胞等多种细胞。但对肝干细胞的研究还是以体内实验为主，，没有成熟的分离培养肝干细胞的方法，而建立肝干细胞体外分离培养方法和细胞模型，对其深入研究至关重要，也将为肝脏发生及其相关医学问题的探讨提供一个理想的研究平台。为此，我们从小鼠胚胎肝脏和成体肝脏两个方面同时入手，对建立肝干细胞体外分离培养方法进行了研究。首先为了确证小鼠胎肝中肝干细胞的存在，对来自小鼠胎肝的细胞进行了移植实验，发现受体小鼠的脾脏有多个增生结节出现，而且形成的结节数与移植的细胞数之间存在正相关关系。组织病理学和免疫组化分析表明，结节中的细胞呈现多种形态，并且分别表达AFP、CD34、CK19等多种分子标志，从而证实在小鼠胎肝中存在着具有多分化潜能的肝干细胞。然后，利用体外培养和体内扩散盒培养技术对小鼠胎肝细胞进行了分离培养，得到了表达AFP、CD34及Albumin等特异性分子标志的细胞克隆，并能传4-5代。另外，根据目前对于肝干细胞在成体肝脏中的定位，利用门静脉灌流消化法分离并建立了来源于成体小鼠肝脏的呈现上皮样生长的细胞系。体内移植实验表明，这一细胞不仅可在受体鼠内增殖形成脾结节，而且结节内细胞可以表达肝细胞和胆管上皮细胞的特异性标志，表明这一细胞系具有肝原始细胞的特性。最近，来自啮齿类和人的移植实验均表明，骨髓细胞可以分化产生卵圆细胞，并进而生成肝细胞，从而引发了我们对于肝干细胞的可能来源进行探讨。通过Mx-cre~+雄性骨髓细胞被移植入雌性受体鼠内，PCR分析和免疫组织化学结果显示，受体鼠的部分肝细胞和胆管上皮细胞均有Mx-Cre的阳性表达。另外，在受体鼠的其他多种组织，如肾脏、脾脏、皮肤等，也发现Mx-Cre culrure anJ ChCharacterizatjon of Mouse HepaticStem CeCek Absrracr 一阳性细胞的存在。这些方法和相应细胞系的建立以及相关的探讨将为肝干细胞广泛而深入的研究奠定基础。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R329.2

【参考文献】