Wip1基因敲除对间充质干细胞生物学特性的影响
本文关键词：Wip1基因敲除对间充质干细胞生物学特性的影响，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：MSC(mesenchymal stem cell,MSC)是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞,它可以向成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、肌细胞等分化,以MSC移植是治疗组织损伤修复理想的根治手段,因此阐明MSC的作用机制十分重要。Wip1(Wild type p53-induce phospatase 1)是一种依赖于p53高表达的新型原癌基因,参与多种信号通路调控,在细胞稳态调控、DNA损伤修复、肿瘤发生、抗衰老及免疫调控等方面发挥重要作用。最近有研究表明,Wip1可抑制MSC的增殖进而增强MSC的迁移能力。然而目前尚无研究报道Wip1基因对MSC生物学特性及免疫调控功能的影响。为此本研究利用Wip1基因敲除小鼠,分离获得骨实质来源MSC用以探究Wip1基因对MSC生物学特性及免疫学特性的影响。我们首先从Wip1野生型和基因敲除型小鼠中分离得到Wip1野生型(WT)和基因敲除型(Wip1-/-)MSCs,通过倒置显微和CCK-8法观察和检测MSCs的生长特性,流式细胞术检测MSCs的细胞表型和细胞周期;采用油红O染色、碱性磷酸酶染色和von Kossa染色法检测MSCs的诱导分化能力,荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,Q-PCR)检测成脂和成骨分化表达的关键转录因子。将MSCs与树突状细胞(dendritic cells,DCs)共培养,采用淋巴母细胞转化实验(Lymphocyte transformation test,LTT)、混合淋巴细胞反应实验(Mixed lymphocyte reaction,MLR)检测MSCs对T淋巴细胞增殖能力的影响,异基因小鼠皮瓣移植实验检测Wip1敲除对MSCs免疫抑制功能的影响。研究结果表明,利用骨片法可分离获得Wip1-WT MSCs和Wip1-/-MSCs,两种MSCs均具有成纤维样的细胞形态;流式细胞术检测细胞表型,均阳性表达Sca-1,CD29,CD105,阴性表达CD31,CD34,CD45,和MHCII;上述结果提示,Wip1基因敲除不影响MSCs的细胞形态和表型。CCK-8检测MSCs生长特性,结果显示,Wip1缺失可显著地抑制MSCs的增殖,使其阻滞于G2期,增殖速度减慢。诱导分化实验结果表明,两种MSCs均具有成脂和成骨分化能力,Wip1缺失可显著降低MSCs的成脂和成骨的分化能力,且相关的关键转录因子C/EBPα、PPARγ、Runx2和Osteocalcin的表达亦显著降低(*p0.05)。LTT法和MLR法检测MSCs免疫功能,结果表明,Wip1-/-MSCs可显著抑制T淋巴细胞增殖,且具有剂量依赖性(*p0.05)。将MSCs与DCs共培养,结果显示Wip1-/-MSCs抑制DCs成熟的能力显著降低。异基因小鼠皮瓣移植体内实验亦表明Wip1-/-MSCs的免疫抑制能力显著下降。上述实验结果提示,Wip1作为调控MSCs生物学特性和免疫功能的新型调控子,在未来MSCs的临床应用中将发挥重要作用。
【关键词】：Wip1 间充质干细胞 生物学特性 免疫调控功能
【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R329.2
【目录】：
- 中文摘要5-7
- 英文摘要7-9
- 英文缩写9-10
- 前言10-12
- 材料与方法12-22
- 结果22-27
- 附图27-38
- 附表38-40
- 讨论40-44
- 结论44-45
- 参考文献45-51
- 综述51-60
- 参考文献56-60
- 致谢60-61
- 个人简历61
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