尿酸对培养人脐静脉内皮细胞NO-NOS通路及ADMA-DDAH系统的影响

发布时间：2020-04-06 13:08

【摘要】：目的 观察尿酸（uric acid，UA）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）NO-NOS通路及ADMA-DDAH系统的影响。方法 取3～6代HUVECs的单细胞悬液用于实验。1.浓度依赖性实验分四组：对照组、UA200μmol/L（UA2组），UA400μmol/L（UA4组），UA600μmol/L（UA6组）与HUVECs共同孵育24h 2.时间依赖性实验用UA600μmol/L与HUVECs共同孵育，分别观察1、3、5、7天。收集培养液用以检测一氧化氮（NO）活性以及超氧化物歧化酶（SOD）活性、非对称二甲基精氨酸（asymmetric dimethylarginine，ADMA）、血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ, Ang II）浓度，一氧化氮合酶（NOS），细胞裂解液用于测定二甲基精氨酸二甲氨水解酶（dimethylarginine dimethylaminohydrolase，DDAH）活性。ADMA采用高效液相色谱法分析（high performance liquid chromatography，HPLC），DDAH活性用L-胍氨酸浓度(L-citrulline，L-cit)表示。裂解液DDAH的表达用蛋白免疫印记分析(Western blotting)。结果 1、与对照组相比，三种浓度UA组NO明显升高（15.70±2.29、44.00±5.39、55.56±7.35 vs 4.74±1.22μmol/L，P0.01）， NOS活性（3.79±0.49、4.58±0.67 vs 2.11±0.33U/L，P0.05）、DDAH活性（L-cit浓度 156.78±4.56、160.78±4.89 vs 102.56±2.32μmol/L,P0.05）活性则在UA4、UA6两组才见明显增加，而同时见ADMA浓度降低（0.62±0.042、0. 58±0.046 vs 0.93±0.048μmol/L，P0.05），AngII浓度、 DDAH则无显著差异。另外SOD活性在UA4、UA6两组升高(34.07±3.65、42.07±4.33 vs 22.85±2.71U/L ，，P0.05)，2、UA6组1、3、5、7天各时段NO浓度、NOS活性、DDAH活性均比对照组更高，而ADMA浓度降低，AngII浓度、DDAH表达无明显差异。SOD活性亦增加。除NOS活性在第七天明显下降，其余各项检测指标在不同时段组没有明显的差异。结论 1、短期尿酸刺激使HUVECS分泌NO增多，且呈浓度依赖，而时间依赖不明显。2、尿酸通过增加DDAH活性降解内源性NOS竞争抑制剂ADMA,使NOS活性增加而生成 NO增多。3、尿酸刺激不增加AngII浓度.4、尿酸使SOD活性增加
【学位授予单位】：江西医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R329.2

【引证文献】

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本文编号：2616551