传染性支气管炎病毒S基因的克隆及在原核细胞中的表达

发布时间：2020-04-06 16:07

【摘要】： 鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis，IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus，IBV)引起的一种急性高度接触性传染病，在世界范围内广泛流行，造成重大的经济损失。IBV变异速度快，血清型众多，各血清型间缺乏交叉保护能力，防治困难。 1997年周继勇等从以腺胃肿大为特征的病鸡腺胃中分离到一株嗜腺胃IBV，命名为IBV-ZJ971。研究表明IBV-ZJ971 S1基因与IBVH120同源性很高，但组织嗜性迥然不同。为了在分子水平上探讨IBV-ZJ971组织嗜性改变的机理，，并为新型疫苗的研制起铺垫工作，我们克隆测序了IBV-ZJ971 S基因，并在大肠杆菌中表达了S基因。同时还克隆测序了标准株H52 S基因。研究结果显示，IBV-ZJ971具有以下分子特征：1)ZJ971第3241位碱基由G突变为T，形成一个终止密码子，造成S基因翻译提前终止，其S2蛋白比IBV-H52少82个氨基酸，2)ZJ971 S基因与呼吸型IBV-H52、M41、Beaudette、KB8523同源性很高，尤其是与IBV-H52同源性高达99.71％，但与Ark99、6／82、Cut2、B1648等毒株同源性较低(83.33-88.52％)。3)ZJ971 S基因第343、395、484、2555、2706、3241位核苷酸与H52及其它对照毒株不同，其中除2706位以外，其余都是有意义突变。4)对IBV-ZJ971、H52、M41、Beaudette、Ark99、6／82、Cut2、KB8523、B1648 S蛋白一级结构分析显示，ZJ971 S蛋白因多处氨基酸突变而不同于其它IBV，他们是：115位氨基酸由Tyr突变为His导致亲水性增加；130位、132位突变为Pro可能造成α螺旋不能形成；162位氨基酸由Asn突变为Tyr；852位突变为Gly导致S2蛋白亲水性降低，使S1蛋白构象因S2蛋白二级结构的改变而改变。这些特征说明ZJ971病毒株因翻译的提前终止以及核苷酸的点突变和氨基酸的改变，使其成为不同于其他IBV的新的传染性支气管炎变异株。首次将IBV S基因插入原核表达质粒并转化大肠杆菌，使IBV的S蛋白得到了完整的表达，说明分子量较大的S基因可在原核细胞中表达，这为进一步开展IBV结构蛋白及新型疫苗研究奠定了基础。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：Q785

【引证文献】