B群流脑新疫苗候选抗原NMB0315免疫效果的初步评价

发布时间：2017-03-23 07:21

  本文关键词：B群流脑新疫苗候选抗原NMB0315免疫效果的初步评价，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]研究原核重组表达的B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315(r NMB0315)在诱导小鼠产生特异性免疫应答中的作用、免疫血清抗体体外杀菌活性和重组蛋白的免疫保护效果,初步评价r NMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的潜力。[方法]以B群脑膜炎奈瑟菌标准株MC58基因组DNA为模板,PCR扩增NMB0315基因,克隆至p ET-30a原核表达载体中,经Bam H I和Xho I双酶切及测序鉴定重组质粒。将构建成功的原核重组表达载体p ET-30a/NMB0315转化大肠杆菌BL21中大量表达重组蛋白,经His亲和层析纯化重组蛋白,Western-blot鉴定其抗原性,反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分析r NMB0315蛋白的纯度。纯化鉴定后的重组蛋白经腹腔注射免疫雌性BALB/c小鼠,采用间接ELISA法检测蛋白疫苗免疫小鼠血清中抗NMB0315特异性总Ig G及其亚类抗体水平、小鼠生殖道黏膜分泌物中抗NMB0315特异性s Ig A抗体水平及经r NMB0315刺激后小鼠脾淋巴细胞上清液中IFN-γ、IL-4水平,CCK8法检测小鼠的脾淋巴细胞增殖刺激指数(SI);按一定比列混合乳兔补体、免疫血清及生长至对数期的MC58菌液,测定免疫血清体外杀菌效价;观察NMB0315重组蛋白疫苗对感染B群脑膜炎奈瑟菌雌性BALB/c小鼠的免疫保护效果。[结果]成功构建了原核表达重组载体p ET-30a/NMB0315。r NMB0315蛋白能在培养上清中以可溶性状态表达。r NMB0315具有良好的免疫原性,能诱导产生较高水平的体液免疫应答:包括血清特异性Ig G、Ig G1、Ig G2a、Ig G3、Ig G2b和生殖道黏膜特异性s Ig A,免疫后第6周抗体效价分别为1:150,000、1:85,000、1:60,000、1:35,000、1:30,000和1:30,000;在r NMB0315免疫的2、4、6周,血清Ig G2a/Ig G1的比值分别为0.673,0.810,0.685,比值均小于1。r NMB0315也能诱导产生较高水平的细胞免疫应答,疫苗免疫第6周,小鼠脾淋巴细胞增殖反应SI值(1.56±0.056)明显高于PBS(0.146±0.032)、FA(0.310±0.044)对照组(P0.001)。与反映体液免疫有关的细胞因子IL-4(210.86pg/m L)和反映细胞免疫有关的细胞因子IFN-γ(157.59pg/m L)的水平,FA+r NMB0315组均明显高于PBS、FA(Freund adjuvant,FA)对照组(P0.001)。r NMB0315疫苗免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价为1:128,72小时内对实验小鼠的免疫保护率为90%。[结论]1.原核表达的r NMB0315具有良好的免疫原性,能诱导实验小鼠产生高水平的体液免疫和细胞免疫,且以Th2倾向性体液免疫应答为主;也能诱导生殖道黏膜局部产生较高水平的特异性s Ig A抗体。2.r NMB0315疫苗对感染B群脑膜炎奈瑟菌的BALB/c小鼠具有良好的免疫保护效果;在补体介导下,末次免疫血清在体外具有较强的杀菌活性。
【关键词】：B群脑膜炎奈瑟菌 外膜蛋白NMB0315 重组蛋白疫苗 免疫活性 免疫保护
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392-33
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略语索引10-12
• 第1章 绪论12-14
• 第2章 实验材料14-18
• 2.1 主要的实验仪器14-15
• 2.2 菌株、质粒及试剂15-18
• 第3章 实验方法18-32
• 3.1 原核重组载体的构建及鉴定18-24
• 3.2 重组蛋白NMB0315的表达、纯化鉴定24-27
• 3.3 B群脑膜炎奈瑟菌NMB0315蛋白疫苗的免疫保护作用27-30
• 3.4 统计学方法30-32
• 第4章 实验结果32-48
• 4.1 原核表达载体pET-30a/NMB0315的构建及鉴定32-34
• 4.2 p ET-30a/NMB0315重组质粒的表达及纯化34-36
• 4.3 rNMB0315蛋白疫苗免疫活性评价36-45
• 4.4 rNMB0315 蛋白疫苗的免疫保护效果和免疫血清体外杀菌活性45-48
• 第5章 讨论48-52
• 第6章 结论52-54
• 参考文献54-60
• 文献综述 160-68
• 参考文献65-68
• 文献综述 268-78
• 参考文献73-78
• 附录78-82
• 作者攻读学位期间的科研成果82-84
• 基金项目84-86
• 致谢86

【共引文献】

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1 谢梅花;李开铭;胡四海;;B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白作为疫苗候选抗原的研究进展[J];现代免疫学;2014年06期

  本文关键词：B群流脑新疫苗候选抗原NMB0315免疫效果的初步评价，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：263238