旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原单克隆抗体的制备及鉴定

发布时间：2020-04-18 22:06

【摘要】：目的 利用杂交瘤技术建立分泌抗旋毛虫肌幼虫排泄分泌(ES)抗原单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株，并对其及分泌的McAb进行鉴定。 方法 用旋毛虫肌幼虫ES抗原免疫BALB／C小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2／0细胞融合，，筛选分泌高滴度McAb杂交瘤细胞株，制备腹水进行纯化。采用ELISA间接法、央心法、竞争法分别测定培养细胞上清液及腹水中McAb滴度、相对亲和力和相加效应，琼脂双扩散试验鉴定免疫球蛋白类型，检测McAb与日本血吸虫成虫抗原、虫卵抗原、弓形虫RH株速殖子抗原、猪囊虫囊液抗原、包虫囊液抗原、旋毛虫成虫表皮抗原、成虫可溶性抗原、成虫ES抗原、肌幼虫可溶性抗原、肌幼虫48hES抗原、肌幼虫72hES抗原的交叉反应。电镜观察杂交瘤细胞超微结构，计数染色体数目及观察杂交瘤细胞分泌McAb的稳定性。 结果 筛选出2株分泌高滴度抗旋毛虫肌幼虫ES抗原McAb杂交瘤细胞株。电镜显示：杂交瘤细胞具有肿瘤细胞和浆细胞的特征，胞浆内可见大量分泌颗粒；杂交瘤细胞染色体数目平均为98.6条：2株杂交瘤细胞均能稳定分泌McAb；2株McAb均属IgM类，B2C12株培养上清液和腹水McAb滴度分 天津医科大学硕士学位论文 别为l:1280和l:2.O48xlod，EllFll株为1:640和l.024x10‘，其中 前者较后者的相对亲和力高;2株McAb识别ES抗原不同的抗原决定簇; McAb与日本血吸虫成虫抗原、虫卵抗原、弓形虫RH株速殖子抗原、猪囊 虫囊液抗原、包虫囊液抗原、旋毛虫成虫表皮抗原、成虫可溶性抗原、成虫 ES抗原、肌幼虫可溶性抗原、肌幼虫48hES抗原、肌幼虫72hES抗原均不 发生交叉反应。 至吉士仑 获得2株抗旋毛虫肌幼虫ES抗原杂交瘤细胞株，均能稳定分泌敏感性 强、特异性高的IgM类McAb，并可识别不同的抗原决定簇，·为进一步建立 检测旋毛虫循环抗原(CAg)、早期诊断旋毛虫病诊断试剂盒和制备基因工 程抗体准备了理想的试验材料。
【图文】：

人工培养的肌幼虫(x40)

人工培养的肌幼虫(又100)
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R392

【参考文献】

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本文编号：2632587