大鼠早期心肌缺血cTnT、Desmin与CX43免疫组化研究在法医病理学上意义

发布时间：2020-04-26 16:47

【摘要】： 急性心肌缺血是引起心脏性狞死的常见原因之一，在法医学的实践中经常遇到。在实际工作中，由于我们接触到的急性心肌缺血往往是在数小时甚至几分钟内造成死亡，在肉眼检查及普通光镜观察通常不能发现心肌特征性的形态学改变。因此，对此类案件在形态学上如何诊断早期心肌缺血性病变一直是法医病理学研究的重要课题。心肌肌钙蛋白T(Cardiac troponin T，cTnT)是心肌收缩调节蛋白肌钙蛋白(Troponin，，Tn)的亚单位之一，位于细丝上。目前多数研究证明，在出现心肌缺血梗死后，患者血液中cTnT浓度明显增高，且其浓度的变化，可反应心肌缺血性梗死的面积及其预后情况。对早期心肌缺血中应用cTnT进行免疫组织化学研究尚未见报道。结蛋白(Desmin)是心肌的中间丝蛋白，是细胞骨架蛋白的组成部分，这在早期心肌细胞缺血受损时，往往会脱失，国内外已有报道，但结果不一。而连接蛋白43(Connexin 43，CX43)是心脏的细胞缝隙连接蛋白，主要分布在心肌闰盘上，与心肌细胞间信息传导相关。目前国外利用免疫荧光法、激光共聚焦免疫荧光法观察研究证明，在心肌缺血性心脏疾病中有异常表现，尚未见利用免疫组化对早期心肌缺血性病变研究的浙江人学硕十学位论文相关报道。本研究旨在通过免疫组化方法，检测cTnT、Desmin及CX43在大鼠急性心肌缺血实验模型的表达，探讨它们在eVj心肌缺血．时的分布惜况， ’为早期心肌缺血的法医病理学诊断捉供一项重要指标及理论依据。材料与方法 1、实验动物分组及急性心肌缺血模型的建立实验选用SD人鼠（浙江省医学科学院提供）60只，雌雄不限，4“月龄，体重300土359，随机分为止常对照组、缺血持续15Inin织、缺血持续30un组、缺血持续 lh组、缺血持续刀组、缺血持续讣组。每织 10只。上常对照组采驭麻醉后开胸，直接剪取心脏。缺血各组根据文献方法给扎左冠状动脉，在不同时间剪取心脏。 2、固定、取材及切片将剪取的心脏立刻放入 10％福尔马林溶液中饲定，2411后取山，（卜山虹中段横取Zln＊）旱的组织块，？K规脱水、透明、浸蛤、包圳，Leitz］52切片机迁续切片，）ggr为sum。 3、HE染色及免疫组化染色常规方法对每纠心脏切片洲IHE染色。采用 DAKA公司捉供 Ev卜巾n二步法免疫织化试剂盒，一抗分别为鼠抗cTnT抗体（l：100稀释）、兔抗CX43抗体（l：50 稀秆）、鼠抗Deslnin抗体（l：100稀秆），操作按试剂盒说明＊进行，DAB显色，复染封片，Olympus光学显微镜观察。 4、图像分析对各组抡疫组化切片，在O…。pUS－BHZ光学显微镜下观察，在左心壁及室间隔缺血部位随机选取 5个视野，经摄像头传入电脑后，利用 HPIAS．1000（高清晰度病理图像分析仪，High resolution Pathological Image Analysis System，华中科技二浙江大学硕士学位论文大学同济医学院）进行图像分析。对。TnT及Desmin的各组免疫组化染色切片，主要测量其染色缺失面积及缺失区平均灰度。 5、统计分析 ’数据以平均数士标准差表示，用 SpSS统计软件进行单因素方差分析（one－wny ANOVA）。结果 1、常规HE染色：正常对照组及急性心肌缺血各组细胞染色清晰，横纹清楚，细胞核致密，细胞结构完整，未见明显的细胞坏死及炎症细胞浸涧。正常组与各组早期心肌缺血之间无明显差异。 2、C＊＊T免疫组化染色正常组低倍镜下见心肌纤维染成棕黄色，术见明显缺染；高倍镜下见阳性着色呈横纹样表现，染色清晰。在心肌缺血持续 15min～讣的各组，均可见到不同程度的心肌细胞内 CTCT缺火，与正常组相比，有显著性差异（P＜0刀1）：两两比较中缺火面积在缺血刀内随着时间的延长而增大（P＜0刀 1）。缺血各组缺染区域灰度与正常组比较，均有显著性差异（P＜0．of）。30min组与 15min组之间有显著性差异（P＜0刀1）；而30mh以后各组表现为较完全的缺大，相互之间比较无明
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R363

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