小鼠桑葚期和囊胚期胚胎冻存方法的研究

发布时间：2020-04-27 06:15

【摘要】： 目的：研究两种冷冻保护剂乙烯已二醇(Ethylene Glycol,EG)和甘油(Clycero,GC)在不同浓度和暴露时间的条件下对桑葚胚及囊胚的毒性影响；比较桑葚胚、早期囊胚和囊胚经玻璃化法(Vitrification)、EG慢速冷冻和GC慢速冷冻三种方法冻融后胚胎继续发育的潜能；初步确定玻璃化法冷冻种植前晚发育时期胚胎的最佳阶段。 方法：1．桑葚胚、早期囊胚和囊胚分别暴露于1.5M EG磷酸盐缓冲液、1.5M GC磷酸盐缓冲液20min，6.0M EG磷酸盐缓冲液5min，以暴露于不含冷冻保护剂的磷酸盐缓冲液为对照，观察在胚胎体外培养系统M16培养液继续发育的情况。2．桑葚胚、早期囊胚和囊胚三个发育阶段的胚胎均用玻璃化法、EG慢速冷冻和GC慢速冷冻法冻存，比较三种方法冻融后胚胎继续发育的情况。3．比较三个阶段胚胎经玻璃化法冻存后冻融胚胎继续发育的情况。 结果：1在1.5M EG磷酸盐缓冲液、1.5M GC磷酸盐缓冲液中暴露20min，6.0M EG磷酸盐缓冲液暴露5min后，在体外培养中桑葚胚、早期囊胚和囊胚继续发育与对照组相比没有显著性差异，对胚胎没有明显毒性影响。2桑葚胚经玻璃化法、EG慢速冷冻法和GC慢速冷冻法三种方法冻存后，冻融胚胎囊胚形成率分别为：85.7％、71.1％、48.7％，囊胚孵出率分别为：59.5％、42.2％、23.1％，玻璃化法和EG慢速冷冻法高于GC慢速冷冻法(P＜0.01，，P＜O.05)，玻璃化法与EG慢速冷冻法相比没有显著性差异(P＞0.05)。三种方法冻存早 天津医科大学硕士学位论文 期襄胚融解后扩张襄胚形成率分别为65.钱、26.既、41%，班胚孵出率51.钱、 l外、28.既，冻存班胚融解后囊胚重新扩张率为43.既、21 .1%、22.5%，. 胚孵出率为29.2%、10.5%、1既。在早期襄胚和澳胚的冻存中，玻璃化法冻 融后胚胎继续发育率高于EG慢速冷冻法和GC慢速冷冻法(P0 .01，P0 .05) EG慢速冷冻法与Gc慢速冷冻法相比没有显著性差异(P0 .05)。 结论:1.SMEG、1.SMGC溶液及6.0施G在本研究采用的冷冻条件下对胚 胎没有毒性影响。对干桑甚胚，玻璃化法和EG慢速冷冻法优于GC慢速冷冻 法;早期囊胚和囊胚玻璃化法冷冻效果优于EG和Gc慢速冷冻法。在慢速冷 冻中，EG较GC更适于桑套胚。桑甚胚可能是玻璃化法冻存种植前晚发育时 期胚胎的最佳阶段。
【图文】：

三种方法冻存桑甚胚后冻融胚胎生长情况

三种方法冻存早期囊胚后冻融胚胎生长情况
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R321

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本文编号：2641966