炎症小体在控制隐球菌荚膜突变株感染中的功能与机制研究

发布时间：2017-03-24 12:05

  本文关键词：炎症小体在控制隐球菌荚膜突变株感染中的功能与机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：天然免疫是免疫系统的一个重要组成部分,是宿主对抗病原微生物的第一道屏障。在天然免疫系统中,一个叫做病原识别受体的分子模式是其一个重要的组成部分。这些病原识别受体存在于细胞膜的表面或细胞质内。NOD样受体(NOD like receptor,NLR)是在天然免疫中识别细胞内病原体感染的一类模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR),在机体早期识别病原微生物及危险信号方面发挥重要的作用。一些NOD样受体比如NALP,NAIP和NLRC4可以形成叫做炎症小体的分子模式。目前已经确定多种炎症小体参与了针对多种真菌的宿主防御反应,病原体也已经进化出多种相应的机制来干扰机体的炎症小体的活化。作为天然免疫系统的重要组成部分,炎症小体在对抗病原微生物感染过程中发挥重要作用。新生隐球菌是一种重要的致病真菌,主要侵犯中枢神经系统,也可侵犯肺部、皮肤等器官。该菌主要感染AIDS病人等免疫缺陷病人,患者死亡率很高。虽然人们对细胞表面识别隐球菌的受体进行了深入的研究,但是对于识别隐球菌的细胞内受体却鲜有报道。炎症小体作为天然免疫系统的一个重要组成部分,在抗白念珠菌和烟曲霉等病原真菌感染中发挥重要作用。我们的研究成果表明隐球菌荚膜突变株cap59Δ可以激活NLRP3炎症小体,而AIM2和NLRC4炎症小体均不能识别该病原菌。并且在NLRP3炎症小体识别隐球菌荚膜突变株cap59Δ过程中,菌体的活力是必不可少的。而且滴鼻感染小鼠肺组织的结果表明NLRP3炎症小体对于早期感染隐球菌荚膜突变株的小鼠控制肺组织中的免疫细胞迁移数及菌载量过程中发挥重要作用。而且我们后期的研究也试图找出cap59Δ用于激活NLRP3炎症小体的成分,研究结果表明cap59Δ的RNA成分可能是一个重要的激活因子。
【关键词】：隐球菌 荚膜 cap59Δ NLRP3 炎症小体
【学位授予单位】：上海师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第1章 绪论9-19
• 1.1 PRR的发现及分类9-10
• 1.2 不同的PRR在识别真菌方面发挥的作用10-11
• 1.3 隐球菌分类及毒力因子的概述11-13
• 1.4 隐球菌的荚膜成分GXM与天然免疫13-14
• 1.5 隐球菌的荚膜成分Gal XM与天然免疫14
• 1.6 隐球菌的荚膜成分MPs与天然免疫14-15
• 1.7 调理素作用下隐球菌与宿主细胞的互作15
• 1.8 隐球菌其他逃脱机制与天然免疫系统中的免疫细胞15-16
• 1.9 隐球菌的其他结构及其组分与天然免疫系统16-17
• 1.10选题意义17-19
• 第2章 NLRP3炎症小体识别新生隐球菌荚膜突变株的研究19-39
• 2.1 材料方法:20-23
• 2.1.1 实验动物和试剂20
• 2.1.2 隐球菌的培养20
• 2.1.3 GXM的分离与荚膜突变株包裹GXM20-21
• 2.1.4 细胞培养及刺激21
• 2.1.5 knockdown THP-1 细胞系的建立21
• 2.1.6 实时定量PCR21-22
• 2.1.7 ELISA和western检测蛋白22
• 2.1.8 ASC oligomerization的检测22
• 2.1.9 体内滴鼻感染模型的诱导22
• 2.1.10重复性及数据处理22-23
• 2.2 实验结果23-38
• 2.2.1 荚膜缺陷型隐球菌可以激活炎症小体23-25
• 2.2.2 隐球菌荚膜突变株可以在人巨噬细胞中激活NLRP3炎症小体25-28
• 2.2.3 隐球菌荚膜突变株cap59Δ 诱导小鼠骨髓来源树突状细胞分泌IL-1β 和IL-18依赖于NLRP3炎症小体而不依赖AIM2和NLRC4炎症小体28-30
• 2.2.4 隐球菌荚膜突变株cap59Δ 激活NLRP3炎症小体需要ROS的产生钾离子的参与以及SYK信号途径30-33
• 2.2.5 隐球菌荚膜突变株cap59Δ 激活炎症小体需要菌体细胞壁与宿主细胞的直接接触以及菌体的活性33-36
• 2.2.6 体内的NLRP3炎症小体在对抗隐球菌荚膜突变株感染方面发挥的作用36-38
• 2.3 小结38-39
• 第3章 隐球菌荚膜突变株RNA在激活NLRP3炎症小体过程中的作用39-48
• 3.1 材料方法:40-41
• 3.1.1 实验用器材及试剂40
• 3.1.2 隐球菌的培养及菌株RNA的抽提40
• 3.1.3 隐球菌株RNA的纯化及电泳跑胶40-41
• 3.1.4 细胞的培养及细胞脂质体转染41
• 3.1.5 ELISA41
• 3.1.6 实验数据的处理及重复性41
• 3.2 实验结果41-46
• 3.2.1 热处理后的隐球菌荚膜突变株cap59Δ 仍然可以诱导细胞吞噬41-42
• 3.2.2 热处理后的隐球菌荚膜突变株cap59Δ 的RNA组分减少42-43
• 3.2.3 隐球菌荚膜突变株cap59Δ 的RNA能够诱导JASWSII,小鼠来源的树突状细胞，，THP-1 分化的巨噬细胞分泌IL-1β43-45
• 3.2.4 隐球菌荚膜突变株cap59Δ 的RNA可以回补经过热处理后的隐球菌荚膜突变株cap59Δ 诱导细胞分泌IL-1β 的能力45-46
• 3.3 小结46-48
• 第4章 结论48-51
• 参考文献51-60
• 攻读学位期间取得的研究成果60-61
• 致谢61-62

【共引文献】

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  本文关键词：炎症小体在控制隐球菌荚膜突变株感染中的功能与机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：265568