PFT-α联合BMP-2诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究

发布时间：2017-03-24 01:12

  本文关键词：PFT-α联合BMP-2诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:目前,缺血性心脏病在我国甚至全球的发病率越来越高,对人类健康的影响也越来越严重,针对此类疾病的传统治疗方法只能缓解病情,而不能从根本上修复梗死或丢失的细胞;由干细胞分化成心肌细胞来治疗缺血性心脏病可以促进细胞修复及血管再生,近年来通过细胞移植治疗心血管疾病已受到国内外专家学者的高度重视。骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有自我更新的能力,可以分化为多种细胞,包括心肌细胞,而且具备不涉及伦理争议、易于取材及分离培养、低免疫原性等优点,成为了细胞移植治疗缺血性心脏病的“种子细胞”,但由于BMSCs数量非常稀少,而且随着年龄的增加此类细胞数量在逐渐减少,为了保证治疗效果,大量扩增纯化及提高BMSCs的转化率是十分必要的。目前在诱导剂的单独使用方面已经有大量实验成果,本实验将在此基础上探究PFT-α(P53基因抑制剂)与BMP2(Bone Morphogenetic Protein 2,骨形态发生蛋白-2)分别及联合诱导BMSCs向心肌细胞分化的效果,为细胞移植治疗缺血性心脏病提供可借鉴性参考依据。方法:1 BMSCs诱导分化:取健康SD大鼠四肢长骨,将骨髓中的BMSCs利用离心贴壁法分离出,并纯化,培养于的IMDM培养液(含10%胎牛血清)中,每隔3d换液,选生长良好的第2代BMSCs分别以含PFT-α20μmol/L、BMP-2 0.2ng/ml和加入联合PFT-α20μmol/L及BMP-2 0.2ng/ml的IMDM培养液分组诱导,同时以不加任何诱导剂的培养基的培养组作为对照组,诱导4天后将含有诱导液的培养基除去,加入新培养基(不含诱导液)中继续培养4w。2免疫细胞化学染色:取各实验组以及空白对照组诱导4周的细胞,在化学染色光镜下观察细胞中α-actin(α-横纹肌肌动蛋白)、desmin(结蛋白)、c Tn T(心肌特异性肌钙蛋白)和c Tn I(肌钙蛋白-I)阳性细胞的表达情况。3免疫荧光双标染色技术:取PFT-α联合BMP-2诱导组培养4周的细胞进行爬片,运用免疫荧光染色法对细胞α-actin、c Tn T蛋白进行荧光标记,观察α-actin、c Tn T的共表达情况。4透射电镜观察:将PFT-α联合BMP-2诱导4周的细胞通过离心、脱水等处理制成切片,用透射电镜观察其内部结构。结果:1 BMSCs培养:通过运用离心法与贴壁分离筛选法分离培养的BMSCs细胞接种24 h后贴壁逐渐增多,类圆形;3d后贴壁长梭形细胞数量明显增加;6d后贴壁细胞已有分裂增殖。2免疫细胞化学检测:desmin、α-actin、c Tn T和c Tn I阳性表达的细胞在各诱导组中均可见,通过观察,PFT-α与BMP-2联合诱导组阳性表达细胞明显高于其他组(P0.01或P0.05)。3免疫荧光双标染色:通过观察,PFT-α与BMP-2联合诱导组分化细胞胞浆内有α-actin表达阳性细胞,呈红色,c Tn T表达阳性细胞呈绿色,当二者重叠后观察颜色为黄色,说明联合诱导组有α-actin和c Tn T同时表达的情况。4透射电镜观察:分化细胞呈条带状,部分细胞表面出现突起;胞核位置居中;胞浆含有高尔基复合体、糖原颗粒、粗面内质网等,细胞器丰富;胞浆内还可见细肌丝样结构平行排列,隐约见明暗相间的横纹。结论:1 BMSCs可以通过BMP-2单独诱导、PFT-α单独诱导以及PFT-α联合BMP-2共同诱导等方式成功分化为心肌细胞。2通过对各实验组及对照组分化细胞的desmin、α-actin、c Tn T和c Tn I的表达情况以及形态学观察对比,观察到PFT-α联合BMP-2共同诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的阳性率明显高于PFT-α和BMP-2分别单独诱导分化的阳性率,PFT-α与BMP-2联合诱导的方式更加高效。
【关键词】：PFT-α BMP-2 骨髓间充质干细胞 诱导分化 心肌样细胞
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文缩写9-10
• 前言10-11
• 材料与方法11-18
• 结果18-20
• 附图20-27
• 附表27-29
• 讨论29-31
• 结论31-32
• 参考文献32-35
• 综述 骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞研究进展35-50
• 参考文献45-50
• 致谢50-51
• 个人简历51

【参考文献】

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1 曹欣欣;戴玉华;张抒扬;陈连凤;杨琳;方全;严晓伟;;人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化[J];基础医学与临床;2007年02期

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本文编号：264875