胎肝巨核细胞祖细胞增殖分化特征及与细胞周期调控的关系

发布时间：2020-05-09 14:26

【摘要】： 在胚胎发育时期，无论是胎肝造血还是骨髓造血，巨核细胞形态均较小，直到出生后几个月，仍小于成人的巨核细胞。我们以往的研究发现尽管胎肝巨核细胞DNA倍性随胎龄的增加而增加，但直到出生前其DNA倍性仍低于成人。这似乎提示胚胎发育时期巨核细胞的核内复制和DNA倍体化出现发育延迟或阻滞。体外研究表明与成人巨核细胞祖细胞相比，胎儿的巨核细胞祖细胞可产生较多的巨核细胞，这些细胞形态上仍较小，且DNA倍性也低于成人骨髓源巨核细胞。该结果提示胎儿巨核细胞核内复制的延迟可能与其祖细胞的内在修饰第四军医大学硕士论文论文摘要特征有关。然而，胎）［巨核细胞核内复制延迟的机制目前尚不清楚。一些研究发现周期蛋白和CDK在巨核细胞核内有丝分裂的调控上起重要作用，然而，周期蛋白和 CDK在胎儿巨核细胞核内有丝分裂调控上所起的作用，，及其与胎儿巨核细胞核内复制延迟的关系目前全然不知。这一方面是由于骨髓中巨核细胞含量极少，相对来说胎儿体内含量则更少，要获得大量巨核细胞极为困难。另一方面，在以往所建立的巨核细胞培养体系中，大多使用的是复合细胞因子，细胞不但可以向巨核细胞分化，也可以向其它造血细胞分化，而且，体系中巨核细胞的含量低，成熟程度也低。因此，很难获得足够量的细胞进行进一步研究。另外，由于在复合细胞因子中，有些细胞因子怕 IL七，GM｛SF 等）可以通过刺激辅助细胞产生其它的细胞因子刺激巨核细胞的增殖，在这样体系中获得的巨核细胞增殖分化特性的结果部分是由于间接调节作用所引起。近年来由于仆的成功克隆表达和造血干细胞分离技术的完善，使进行这方面的研究成为可能。本文首先建立了胎肝CD34”细胞巨核细胞培养体系，对胎肝巨核细胞祖细胞的增殖分化特征及与细胞周期调控的关系进行了探索，为进一步的研究奠定了基础。在本项研究中，我们采用免疫磁珠分离人胎肝和成人骨髓CD34”细胞，并建立w 诱导下的巨核细胞体外培养体系。观察该体系中CD41＋细胞的细胞数，形态学特征，表型特征，成熟程度和DNA倍性的变化，以了解CD34”细胞在含有P 的巨核细胞体外培养体系中增殖分化的特点。在此基础上，分析了周期蛋白表达的变化，以了解周期蛋白在巨核细胞增殖分化过程中所起的作用。结果发现：（1）经 12d培养后，TPO使胎肝源 CD34“细胞从 IX 10’个细胞加增加到 13．09士 3．06 X 10‘个细胞加1，CD41＋细胞数平均增加了 73．14倍；而骨髓源 CD34”细胞只增加到 1．31士0回 15 X 10‘个细胞／ml，CD41“细胞数平均增加了 8．18倍；－6－第四军医大学硕士论文论文摘要 u）尽管骨髓＠ CD34”细胞to胎n＠ CD34”细胞表z血小板特异性抗原 CD41a， CD42a，CD61和造血干细胞抗原 CD34的免疫表型相同，但几乎所有胎肝 CD34” 源巨核细胞都处在成熟分期的 I和 11期，DNA倍性＄4N。而在骨髓CD34”源巨核细胞中，15％巨核细胞处于成熟分期的工＊和IV期，23％巨核细胞DNA倍性乃N；u）经12d培养后，大多数培养的胎肝源CD34”细胞没有发育完善的界膜系统（DM）和 a－颗粒；（4）vWF在培养骨髓源 CD34”细胞上的表达早于在胎肝源 CD34”细胞上；（5）在整个培养期间，周期蛋白 E和 BI在胎肝源 CD34“ 细胞上的表达逐渐增加，并保持在一个高水平上，在培养的后期，高水平的周期蛋白 BI出现在 GI期细胞上；（6）周期蛋白 DI和 D3在胎肝源 CD34”细胞上的表达，培养初期增加，培养后期下降；（）免疫组化染色分析显示，仅在胎肝CD34”源巨核细胞的胞浆中检测到周期蛋白D3的表达，而在骨髓CD34”源巨核细胞的胞浆和细胞核内均可检测到周期蛋白 D3的表达。本实验结果提示门）胎肝CD34”细胞中含有高比例更原始巨核细胞祖细胞；（2） TPO可通过上调周期蛋白 BI和 E表达，促使巨核细胞祖细胞进入增殖状态，同时伴随着向巨核系的分化；（3）周期蛋白 DI和 D3在巨核细胞分化后期表达下降，周期蛋白 D3的核外表达及周期蛋白BI在0期细胞上的表达可能与胎肝CD34”源巨核细胞延迟进入核内有丝分裂有关。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R392.12

【共引文献】