纳米载体携载外源基因进行体外细胞转染的实验研究

发布时间：2017-03-24 15:14

  本文关键词：纳米载体携载外源基因进行体外细胞转染的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的意义： 基于纳米材料发展起来的技术即纳米技术。纳米材料的体积小，可以穿透各种机体屏障，促进药物更好的被机体吸收利用，并且延长药物在体内的作用时间，，保持药物的血药浓度，既经济又高效，但目前很多纳米转染材料存在成本高，转染效率低，甚至有毒副作用。本文旨在探讨一种新型的纳米载体——ZM5K5（基于玉米醇溶蛋白合成的系列载体之一）与传统的PEI纳米载体携载p-EGFP质粒进行体外细胞转染效率的研究，为纳米载体在生物学、材料学、化学及临床医学等领域的应用提供一个新的思路。 方法： 本文首先应用高效大肠杆菌工程菌种Top10进行p-EGFP质粒在含100mg/ml氨苄青霉素的液体LB培养基中进行扩增，经过质粒DNA的提取、浓度测定后，分别与ZM5K5和传统的PEI载体进行包装，同时进行A549细胞的培养，转染时选用opti-MEM，最终将被ZM5K5和PEI包裹的质粒DNA分别转染到A549细胞中，用共聚焦显微镜观察转染效果。 结果： 1.通过液体LB培养的Top10菌种终浓度经可见光分光光度计测定后，OD260/280为0.4，菌液呈现乳白色，菌体生长处于对数生长期。菌液离心后得到0.6克湿菌，进行质粒DNA的提取，终浓度为2.63μg/μl。 2.人肺腺癌A549细胞在DMEM培养基5%浓度的胎牛血清条件下，生长状态良好，细胞正常贴壁，增殖迅速，转染前细胞覆盖率达80%。 3.经新型纳米载体ZM5K5包裹的质粒DNA转染A549细胞的效率要高于传统的PEI纳米载体，且前者绿色荧光较为稳定不易淬灭。 4.优化转染条件，当培养基中胎牛血清浓度为10%，转染时选用opti-MEM，质粒DNA稀释比例为1：8，转染时间36h，培养条件37℃和5%CO2恒温培养时，纳米载体ZM5K5和bPEI进行质粒DNA的转染效率均有所提高，ZM5K5的转染效果仍好于bPEI。 结论： 1. ZM5k5可以成功携载质粒DNA，并在体外成功转染A549细胞； 2.新型纳米载体ZM5K5包裹的质粒DNA转染A549细胞的效果好于传统的PEI载体； 3. ZM5K5纳米载体的转染效果受DNA的浓度、转染时间等因素影响。
【关键词】：纳米载体 质粒DNA 玉米醇溶蛋白 PEI
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2;TB383.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩写词表10-11
• 第一章 绪论11-12
• 第二章 文献综述12-22
• 2.1 纳米材料12
• 2.2 纳米材料的应用12-13
• 2.3 纳米材料在医学领域的应用13-16
• 2.4 纳米载体携载外源基因16-19
• 2.4.1 纳米基因载体的种类和选择16-17
• 2.4.2 外源基因转染17-18
• 2.4.3 纳米材料包裹外源基因的体外细胞转染18-19
• 2.5 以纳米材料作为基因载体的实验研究进展19-20
• 2.6 玉米醇溶蛋白及相关细胞转染载体20-22
• 第三章 材料与方法22-29
• 3.1 实验材料22-23
• 3.1.1 A549 细胞的获取22
• 3.1.2 质粒 DNA 材料的获取22
• 3.1.3 实验所用试剂22-23
• 3.1.4 实验所用仪器及器材23
• 3.2 实验方法23-28
• 3.2.1 A549 细胞的传代培养23-24
• 3.2.2 将质粒 DNA 转入大肠杆菌细胞及质粒 DNA 的制备24-26
• 3.2.3 PEI 溶液的制备26
• 3.2.4 ZM5K5 溶液的制备26-27
• 3.2.5 A549 细胞转染27-28
• 3.2.6 图像采集28
• 3.3 数据统计分析28-29
• 第四章 实验结果29-34
• 4.1 琼脂糖凝胶电泳检测质粒 DNA 的完整性29
• 4.2 ZM5K5 和 bPEI 纳米载体携载 p-EGFP 质粒转染 A549 细胞29-31
• 4.3 PEI 载体和 ZM5K5 载体携载 p-EGFP 质粒转染 A549 细胞条件的优化31-34
• 第五章 讨论34-37
• 第六章 结论37-38
• 创新性总结38-39
• 参考文献39-43
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果43-44
• 致谢44

【共引文献】

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本文编号：265792