CYLDa对血管新生作用的实验研究

发布时间：2017-03-24 17:14

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【摘要】：研究背景：血管新生(Angiogenesis)是成人体内血管形成的主要方式之一,它指的是在组织已有的血管床上,内皮细胞以出芽的方式从小静脉中迁移出来从而形成管状新生血管的过程。这个过程不仅是众多生理过程的重要基础,而且血管新生异常与众多疾病密切相关,如病理性瘢痕、风湿性疾病、缺血性心脏病等,尤其肿瘤生长与其内部的血管新生具有密不可分的联系。研究血管新生的机理对于治疗上述血管新生相关疾病具有重要临床意义。圆柱瘤病分子(Cylindromatosis, CYLD)对血管新生的作用及其机理还不清楚。CYLD是一种抑癌基因,该基因的突变可以导致人类圆柱瘤病。CYLD作为一种去泛素化酶,能够通过抑制NFκB通路下调NFκB靶基因的表达,从而对炎症反应等产生抑制作用。有研究报道采用RNAi技术下调CYLD的表达后,血管内皮细胞(Vascular endothelial cells, VECs)迁移及血管新生均受到抑制。但CYLD在血管新生过程中的作用尚有如下问题亟待解决：1. CYLD分为三个亚型(CYLDa、CYLDb、sCYLD),它们在结构上存在差异,这提示我们各同工型的功能可能不同,但目前还没有文献对其具体亚型进行研究；2. CYLD对血管内皮细胞的作用是否与其去泛素化酶的活性有关有待验证。本课题将构建CYLDa和CYLDamut(无去泛素化酶活性)腺病毒、CYLDa和CYLDamut转基因小鼠,在细胞迁移、主动脉环模型、肿瘤血管新生模型、Matrigel模型上,采用形态学、细胞生物学和分子生物学的方法,明确CYLDa在血管新生中的作用及是否与其去泛素化酶活性相关。实验目的：探讨CYLDa过表达对体外VECs增殖、迁移及成管的作用,并在体内动物实验验证CYLDa对血管新生的作用；同时,加入CYLDamut组(不具备去泛素化酶活性,从而失去对NFκB通路的抑制作用),通过比较过表达CYLDa和过表达CYLDamut两组的实验结果,从而探究CYLDa调控血管新生的作用及这个作用是否与其去泛素化酶活性相关。实验方法与结果：1)制备CYLDa和CYLDamut腺病毒,通过腺病毒感染的方法,使VECs过表达CYLDa及CYLDamut,采用CCK-8法和细胞划痕损伤分析分别对VECs的增殖及迁移进行检测,并在三维胶原中检测感染腺病毒后的VECs管腔形成能力。2)分别制备CYLDa转基因小鼠、CYLDamut转基因小鼠及WT野生型小鼠的乳腺癌及肺癌模型,观察三组小鼠的乳腺癌组织和肺癌组织中血管新生的情况,并对所取肿瘤组织进行CD31的免疫组化染色,检测血管新生的相对数量。另外,利用向三组小鼠皮下注射Matrigel的方法以及体外培养小鼠主动脉环血管新生的实验验证CYLDa在体内对血管新生的作用。实验结论：1) CYLDa过表达具有抑制血管新生的作用；2) CYLDa过表达抑制血管新生与其去泛素化酶活性无关
【关键词】：圆柱瘤病分子 血管内皮细胞 血管新生 肿瘤
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R363
【目录】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 第一章 绪论9-26
• 1.1 血管新生的研究进展9-18
• 1.1.1 血管新生的意义9-10
• 1.1.2 血管新生的过程10-11
• 1.1.3 调控血管新生的相关因子11-14
• 1.1.3.1 血管生成素11
• 1.1.3.2 血管内皮生长因子11-12
• 1.1.3.3 碱性成纤维细胞生长因子12
• 1.1.3.4 转化生长因子12-13
• 1.1.3.5 血小板反应蛋白13
• 1.1.3.6 色素上皮衍生因子13-14
• 1.1.3.7 基质金属蛋白酶14
• 1.1.4 血管新生相关信号转导通路14-18
• 1.1.4.1 NFκB通路15-16
• 1.1.4.2 Notch通路16-17
• 1.1.4.3 PI3K/AKT-mTOR通路17
• 1.1.4.4 Ras-Raf-MEK1/2-MAPK通路17-18
• 1.2 血管内皮细胞18-19
• 1.2.1 血管内皮细胞的生物学功能18
• 1.2.2 血管内皮细胞的定向迁移18-19
• 1.2.3 血管管腔与血管内皮细胞19
• 1.3 CYLD的研究进展19-24
• 1.3.1 CYLD的分子结构19-21
• 1.3.2 泛素-蛋白酶体介导的泛素化蛋白质降解过程21
• 1.3.3 CYLD翻译后的调控修饰21-23
• 1.3.4 CYLD的生物学功能23
• 1.3.5 CYLD的同工型23-24
• 1.4 CYLD在血管新生中的作用24-25
• 1.5 本论文研究的主要内容及意义25-26
• 第二章 实验部分26-51
• 2.1 人CYLDA基因在体外过表达对VECs细胞生长的影响26-39
• 2.1.1 实验方法26-32
• 2.1.1.1 VECs的复苏与冻存26-29
• 2.1.1.2 腺病毒感染VECs29-30
• 2.1.1.3 CCK-8法检测细胞增殖30-31
• 2.1.1.4 细胞划痕法检测细胞迁移31
• 2.1.1.5 VECs三维胶原成管实验31-32
• 2.1.2 结果32-37
• 2.1.1.1 VECs细胞培养情况32-33
• 2.1.1.2 腺病毒感染VECs结果33
• 2.1.1.3 细胞增殖检测结果33-34
• 2.1.1.4 细胞迁移检测结果34-36
• 2.1.1.5 VECs三维胶原成管实验结果36-37
• 2.1.3 本节讨论37-39
• 2.2 CYLDA转基因小鼠中血管新生的研究39-51
• 2.2.1 实验方法39-44
• 2.2.1.1 转基因小鼠的饲养和管理39
• 2.2.1.2 转基因小鼠肿瘤模型的制备39-40
• 2.2.1.3 免疫组化染色40-42
• 2.2.1.4 血管新生Matrigel模型42-43
• 2.2.1.5 小鼠主动脉环血管新生实验43-44
• 2.2.2 结果44-49
• 2.2.2.1 转基因小鼠肿瘤模型结果44-45
• 2.2.2.2 免疫组织化学染色结果45-48
• 2.2.2.3 Matrigel模型结果48
• 2.2.2.4 小鼠主动脉环血管新生实验结果48-49
• 2.2.3 本节讨论49-51
• 小结51-52
• 参考文献52-61
• 缩略语61-63
• 攻读硕士学位期间取得的科研成果63-64
• 致谢64

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1 王晓琳;CYLDa对血管新生作用的实验研究[D];西北大学;2015年

  本文关键词：CYLDa对血管新生作用的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：265925