人呼吸道合胞病毒临床分离株的生物学特性研究

发布时间：2017-03-24 23:03

  本文关键词：人呼吸道合胞病毒临床分离株的生物学特性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus, RSV)是引起婴幼儿急性下呼吸道感染的重要病原体之一,同时也是造成儿童、老龄人以及免疫能力低下的病人发病甚至死亡的主要原因。预防RSV最有效的方法就是接种疫苗,但到目前为止仍未见安全有效的RSV疫苗问世,因此,对RSV的流行趋势、分离纯化、培养特性等相关知识的研究为进一步研发RSV疫苗提供了重要的参考依据。本论文的实验研究工作主要包括三个方面：(1)临床样本的Vero细胞分离培养物中的病毒检测；(2)RSV分离株的鉴定及分型；(3)RSV分离株的培养特性研究。(1)临床样本的Vero细胞分离培养物中的病毒检测本实验将从48份儿童痰样中筛选到的11份能引起Vero细胞发生合胞现象的分离培养物进行几种常见的呼吸道病毒检测,结果表明11份培养物中,RSV有5份,MuV有7份,PIV2型病毒疑似有4份,PIV3型病毒有2份,AdV有10份,MeV、PIV1型和RV病毒没有。同时发现只有培养物QY-33是相对单一的RSV感染,其他均为两种或两种以上能引起Vero细胞发生合胞现象的常见呼吸道病毒的混合感染。(2)RSV分离株鉴定及分型将唯一一株相对单一RSV感染的分离培养物QY-33进行噬斑纯化,得到一株RSV分离株QY-33,并对其进行鉴定及测序比对,确定此分离株为RSV病毒；然后经巢式PCR扩增出此分离株的G蛋白基因,通过测序比对、系统进化树分析,结果表明此分离株为RSV GAl亚型。(3)RSV分离株的培养特性研究初步探讨RSV分离株QY-33的相关生物学培养特性：测定RSV感染不同细胞的病毒滴度,发现RSV对A549细胞最敏感；培养过程中分别测定细胞内和培养上清中的RSV病毒滴度,发现细胞病变达90%以上时RSV主要存在于培养上清中；测定用不同温度培养的RSV的病毒滴度,发现RSV的最适培养温度是37℃,32℃也行；初步尝试利用微载体技术培养Vero细胞制备RSV病毒,效果较为理想。本论文从儿童痰样中筛选得到一株RSV分离株QY-33,对其进行分型分析,研究其生长培养特性,并初步建立了生物反应器——微载体培养技术培养Vero细胞制备RSV病毒的工艺,为进一步大规模化培养RSV病毒及疫苗研发奠定了基础。
【关键词】：呼吸道合胞病毒 分离株 微载体 培养特性
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R373.14
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-15
• 缩略语索引15-16
• 第一章 绪论16-25
• 1.1 呼吸道合胞病毒基因组结构特征16-17
• 1.2 呼吸道合胞病毒感染的临床症状17
• 1.3 呼吸道合胞病毒的流行情况17-19
• 1.4 呼吸道合胞病毒的药物治疗以及存在的问题19-20
• 1.5 呼吸道合胞病毒预防疫苗研究进展及存在的问题20-24
• 1.6 本论文研究目的及意义24-25
• 第二章 临床样本的Vero细胞分离培养物中的病毒检测25-46
• 2.1 材料与方法25-35
• 2.1.1 材料25
• 2.1.2 主要试剂及药品25-26
• 2.1.3 溶液配制26-29
• 2.1.4 主要仪器29-30
• 2.1.5 方法30-35
• 2.2 结果35-43
• 2.2.1 临床样本的细胞分离培养物中病毒的增殖35-37
• 2.2.2 培养物的初步鉴定37-42
• 2.2.3 培养物病毒类型总结42-43
• 2.3 讨论43-44
• 2.3.1 培养物中病毒的增殖与鉴定43-44
• 2.3.2 培养物中的病毒感染情况分析44
• 2.4 本章小结44-46
• 第三章 RSV分离株QY-33的鉴定与分型46-62
• 3.1 材料与方法46-53
• 3.1.1 材料46
• 3.1.2 主要试剂和药品46-47
• 3.1.3 溶液配制47-48
• 3.1.4 主要仪器48-49
• 3.1.5 方法49-53
• 3.2 结果53-59
• 3.2.1 临床样本培养物QY-33挑单斑纯化RSV病毒53-54
• 3.2.2 QY-33F基因片段的鉴定及测序54-56
• 3.2.3 QY-33G蛋白基因扩增、测序比对及系统进化树分析56-59
• 3.3 讨论59-61
• 3.3.1 RSV分离株QY-33的分离与鉴定59-60
• 3.3.2 RSV的进化60
• 3.3.3 RSV分离株QY-33 G蛋白基因序列测定与分析60-61
• 3.4 本章小结61-62
• 第四章 RSV分离株QY-33的培养特性62-77
• 4.1 材料与方法62-66
• 4.1.1 材料62
• 4.1.2 主要试剂和药品62
• 4.1.3 溶液配制62-63
• 4.1.4 主要仪器63
• 4.1.5 方法63-66
• 4.2 结果66-73
• 4.2.1 RSV分离株QY-33对不同细胞的敏感性66-68
• 4.2.2 RSV分离株QY-33的分布情况68-69
• 4.2.3 温度对RSV分离株QY-33增殖的影响69-70
• 4.2.4 微载体培养Vero细胞培养RSV分离株QY-3370-73
• 4.2.5 PEG—透析袋浓缩后病毒的损失检测73
• 4.3 讨论73-75
• 4.3.1 RSV对不同细胞的敏感性73-74
• 4.3.2 RSV的分布形式74
• 4.3.3 温度对RSV增殖的影响74
• 4.3.4 RSV的微载体培养74-75
• 4.3.5 RSV的浓缩75
• 4.4 本章小结75-77
• 第五章 全文总结77-79
• 第六章 展望79-80
• 致谢80-81
• 参考文献81-88
• 附录A 攻读硕士期间发表论文、专利及参与项目目录88

【参考文献】

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