促肾上腺皮质激素释放激素对胎盘甾体激素合成调节及其机制的研究

发布时间：2020-05-23 02:34

【摘要】：胎盘生成的孕激素和雌激素在人类分娩中起重要作用。孕激素是维持妊娠子宫肌静息状态的主要激素，而雌激素则是激活子宫的激素。虽然人类妊娠末期孕激素和雌激素水平都持续增高，但雌激素／孕激素的值却升高，有利于激活子宫发动分娩。因此研究胎盘雌激素和孕激素生成调节的机理不仅有助于揭示人类分娩启动机制，还可为防治早产等疾病提供理论依据。胎盘合成和分泌的CRH是参与人类分娩启动的重要激素，但胎盘分泌的CRH对胎盘雌激素和孕激素合成的调节及其机制尚不清楚。本研究利用原代培养的人类胎盘滋养层细胞进行了以下两个方面的研究：1、观察CRH是否影响胎盘细胞雌二醇(estradiol，E_2)生成，确定CRH的作用是否通过CRH受体介导，了解CRH调节作用的信号转导途径；明确CRH是否影响胎盘雌激素生成关键酶——细胞色素P-450芳香化酶(P-450 aromatase，P-450arom)的基因转录。2、观察CRH对胎盘孕酮(progesterone，P_4)生成的调节作用及其作用的细胞内信号转导途径；明确胎盘孕激素合成酶即细胞色素P-450侧链裂解酶(P-450 side chain cleavage enzyme，P-450scc)和3β-羟基类固醇脱氢酶1(3β-hydroxysteroiddehvdrogenase1，3β-HSD1)基因的转录是否受CRH调节。主要实验结果和结论如下： 1)CRH促进胎盘细胞生成E_2，且这种作用具有剂量依赖效应。CRH受体拮抗剂α-Helical CRH_(9-41)能够阻断CRH的促进作用，说明CRH的作用是通过CRH受体介导的。α-Helical CRH_(9-41)也能降低细胞E_2基础量的产生，，说明胎盘细胞合成和分泌的CRH也可促进E_2的生成。PKA和PKC的抑制荆(H-89和G6976)都能阻断CRH的作用，表明CRH可通过PKA和PKC途径促进胎盘E_2的生成。应用Northern blot观察P-450arom mRNA的表达，结果显示CRH可以促进P-450arom mRNA的表达，a-Helical CRH_(9-41)、H-89和G6976都阻断CRH促进P-450arom mRNA表达的作用。说明CRH通过促进P-450arom基因的转录，进而增加胎盘细硕士李位格大中次摘要胞E:的生成。 2)CRH抑制胎盘细胞生成P。，抑制作用具有剂量依赖性。CRH受体拮抗剂 a一Heli。alCR比;l能够逆转CRH的作用，说明CRH的作用是通过CRH受体介导的。 a一Hel ical CRH，一;，也能促进细胞P;基础量的产生，说明其阻断了胎盘细胞产生的内源性CRH抑制只生成的作用。PKC的抑制剂叻6976可阻断CRH对P;生成的抑制作用.但PKA的抑制剂H一89也可抑制P;的生成。实时荧光定量PCR测定 P一450see和3p一HSDI mRNA表达的结果显示，CRH抑制P一450see和3p一HSDI mRNA 的表达，a一Helieal CRHg一引能阻断CRH的抑制作用，GO6976也可阻断CRH对 P一450see和3p一HSDI mRNA表达的抑制作用。但H一89却抑制P一450see和3p 一HSDI mRNA的表达。说明CRH可通过抑制P一450see和3p一HSD基因的转录，而减少胎盘细胞P;的生成，其作用途径与PKC有关。夕结论:1、cRH通过促进胎盘P一450arom基因的转录进而促进雌激素的生成，这种作用是由其受体介导。细胞内PKA和PKC信号途径是CRH促进EZ的生成作用的机制之一。2、CRH抑制胎盘P一45Oscc和3p一HSDI基因的转录，从而抑制孕激素的生成，且这种抑制作用由其受体介导。PKC信号途径是其抑制作用的细胞内机制之一。3、CRH促进胎盘雌激素生成而抑制孕激素的生成，从而可能使妊娠末期母体血中雌激素/孕激素的值升高，这可能是CRH启动分娩的机制之一。
【图文】：

电泳图,电泳,试剂盒,基因序列

图2.胎盘细胞总RNA电泳oftheEthediumbromide一stained55、18Sand28SRNAs计bank中人P450arom基因序列，用PrimerPremiers软扩增产物理论值约440bp。TCATGCGAGTCTGGATCTCTGGAGAGGAAACA一3‘GAGGAGAGCTTGCCATGCATCAAAATAACCT一3’R链的合成为模板，按Gibco试剂盒进行RT反应:一HZOS协1omhexamers(SOng/林1)2拼1AI卜g

琼脂糖凝胶电泳,胎盘,DNA聚合酶,分量

29.5林l液4.5pl:3“l1pllpl1协15plTaq一DNA聚合酶(su邝一)ee，72oClmin，40个循环物pl，应用1.5%琼脂糖凝胶电泳分量标一记比较显示约44ObP的条带，
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R33

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