抗五种赤潮藻的单克隆抗体的制备和特性分析

发布时间：2020-05-24 19:27

【摘要】： 目的：建立分泌抗海洋褐胞藻、卵圆褐胞藻、赤潮异弯藻、具齿原甲藻、尖刺拟菱形藻等五种藻的高特异性、高亲和性单克隆抗体杂交瘤细胞株。若该类细胞株所分泌的单克隆抗体结合特定藻抗原，则可利用此类单克隆抗体鉴别此五种不同的藻，从而为赤潮藻的检测、监测和防治提供有效的工具。 方法：将五种藻混合免疫Balb/c小鼠，加强免疫三次后，取血清效价高的小鼠脾脏细胞按一定的比例与SP2/0骨髓瘤细胞混合，加入PEG4000使两者融合。用HAT，HT等选择性培养基培养杂交瘤细胞，然后用间接血凝初步筛选出有抗体分泌的细胞克隆。进一步采用间接ELISA法等，用海洋褐胞藻等五种赤潮藻细胞包被96孔酶标板筛选分泌特异性单克隆抗体的克隆。扩增阳性克隆并冻存，制备腹水，测定腹水效价，用硫酸氨，protein-A等法纯化腹水型抗体。 结果：所得杂交瘤细胞融合率为37.5％。经反相间接血凝、间接ELISA法等筛选到能分泌抗藻单克隆抗体的细胞株，其中9AD2B2对海洋褐胞藻和卵圆褐胞藻的特异性高；15CA7对赤潮异弯藻和尖刺拟菱形藻的特异性高；23BG2和23BG9对赤潮异弯藻、具齿原甲藻与尖刺拟菱形藻的特异性高。而获得的M18号杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体可与以上五种藻产生高效价的明显交叉反应，显示此单抗可代替五种海洋藻的抗血清。在藻最佳包被浓度时，9AD2A8腹水对五种藻的效价均可达到1：3200，23BG9E11腹水五种藻的效价可达1：1280，，两种腹水主要成分均为IgG1。 结论：利用杂交瘤技术能制备出分泌抗五种藻的单克隆抗体的细胞株。该类细胞株分泌的单克隆抗体可特异性地结合到五种藻细胞上，这意味着可用此类单克隆抗体鉴定、检测这五种赤潮藻。
【图文】：

分别加入ZO0uL用5%BS龙PBS液以1:50稀释的M18号上清液、正常小鼠血清，轻轻吹打使细胞悬起，在室温下缓慢旋转温育1h。(6)looorPm离心s而n，用soouLS%BSA一pBs液洗涤两次。(7)分别加入ZOOuL用5%BSA一PBS液以1:50稀释的F工TC标记的羊抗小鼠抗体。吹打使细胞悬起，在室温下旋转温育lh。(s)loootPm离心s而n，用soouLS%Bs午PBs液洗涤两次。(9)用10OuLPBS液悬起细胞，滴加15uL于载玻片，在荧光显微镜下观察。4.5.3免疫荧光结果在绿色激发光下，FITC标记的海洋褐胞藻呈现红色(见图6)，而在FITC的激发光一蓝光激发下，海洋褐胞藻外观为黄绿色(见图7);正常血清作阴性对照时，用蓝光激发藻细胞，细胞表面呈现褐色，此现象说明可能细胞表面有少量非特异结合的RTC(见图8)。海洋褐胞藻曰TC标记绿色激发光对照(400火)海洋褐胞藻曰Tc标记炜渔激发
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R392

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 王惠卿;大连市黑石礁湾赤潮调查与研究[J];环境监测管理与技术;1994年04期

2 齐雨藻,楚建华,黄奕华;诱发海洋褐胞藻赤潮的环境因素分析[J];海洋通报;1993年02期

3 齐雨藻,洪英,吕颂辉,楚建华,张家平,朱从举,李雅琴,梁松,李锦荣;南海大鹏湾海洋褐胞藻赤潮及其成因[J];海洋与湖沼;1994年02期

4 郭玉洁;大连湾赤潮生物──赤潮异弯藻[J];海洋与湖沼;1994年02期

5 林燕棠,杨美兰,陈瑞雯,胡石金,金桂英;广东沿海麻痹性贝类毒素的研究[J];海洋与湖沼;1994年02期

6 夏综万,于斌,史键辉,王寿松;大鹏湾的赤潮生态仿真模型[J];海洋与湖沼;1997年05期

7 张诚,邹景忠;尖刺拟菱形藻氮磷吸收动力学以及氮磷限制下的增殖特征[J];海洋与湖沼;1997年06期

8 俞志明,DVSubbaRao;粘土矿物对尖刺拟菱形藻多列型生长和藻毒素产生的影响[J];海洋与湖沼;1998年01期

9 矫晓阳，郭皓;中国北黄海发生的两次海洋褐胞藻赤潮[J];海洋环境科学;1996年03期

10 刘令梅;赤潮的监测技术和防治措施[J];海洋技术;1998年03期

本文编号：2678876