一株西北人乳头瘤病毒16型L1基因的克

发布时间：2020-06-02 11:35

【摘要】： 目的 人乳头瘤病毒为广泛感染人类皮肤、生殖道、呼吸道等上皮组织的无囊膜小DNA病毒，至今已发现有100多个型别，而HPV16型是我国妇女宫颈癌感染的主要型别。表达人乳头瘤病毒16(HPV16)晚期基因L1，为HPV感染的检测、诊断和治疗奠定基础。 方法 收集宫颈癌组织标本，设计一对L1基因特异引物，用PCR方法从宫颈癌组织中获得L1基因部分片段，构建入克隆载体pGEM-T，双向测定插入片段序列并进行序列分析；亚克隆入pBV220载体，经酶切鉴定后进行温度诱导表达，所得蛋白再行Western-Blot和ELISA鉴定。 结果 实验结果说明成功将L1基因克隆入非融合表达载体，在55kD处出现了L1重组表达的蛋白条带，经ELISA和Western Blot分析，表达的L1蛋白均具有良好的抗原性。 结论 实验中发现所得到的HPV16 L1 DNA序列与国内报道4处碱基变化又有所不同。即原始序列5892处的C变为T；6337处的核苷酸C变为T；6423处的核苷酸A变为G；6799处的核苷酸T变为C。说明各地区的宫颈癌组织中所获HPV16L1基因有所差异，在针对各地区的HPV感染检测时，应考虑地区因素。重组表达蛋白进行Western-blot分析和ELISA杂交鉴定证实表达的L1蛋白能与商品化的乳头瘤病毒抗体发生抗原抗体反应，提示其可能用于检测HPV感染者的抗体。使今后开发出通用、特异、低成本的HPV诊断试剂成为可能，并为基因疫苗的进一步研究提供了有力的依据。
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R346

【参考文献】

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1 张智清,姚立红,侯云德;含P_RP_L启动子的原核高效表达载体的组建及其应用[J];病毒学报;1990年02期

2 张卫,司静懿,李昆,陈连凤,赵维敏,韩日才;人乳头瘤病毒16型亚基因DNA体外转化功能的细胞学研究[J];病毒学报;1991年03期

3 侯芷英，，孙亚洲，商铭，明利华;人乳头瘤病毒16型E6E7ORF转化作用的研究[J];中华实验和临床病毒学杂志;1994年02期

本文编号：2693095