HCMV潜伏感染的老年小鼠AD样神经病理学模型的建立

发布时间：2020-06-07 14:35

【摘要】：目的建立人巨细胞病毒(human cytomegaiovirus，HCMV)潜伏感染的老年小鼠AD样神经病理学模型，观察HCMV潜伏感染引起小鼠大脑皮质神经病理的改变，以期为AD(Alzheimer's disease，AD)的病因学研究及发生机制提供新的思路和合适的动物模型。方法将24只8周龄SPF级BALB／c小鼠按雌、雄1：1配成12对，并随机分成病毒感染组和DMEM对照组，每组6对。病毒感染组每只小鼠腹腔注射HCMV悬液1×10~5PFU／ml 1.0 ml：DMEM对照组小鼠每只腹腔注射DMEM液1.0 ml。以上两组在屏蔽系统中继续饲养十四个月后，将一半小鼠引颈处死，，取大脑组织进行如下实验以确定HCMV的潜伏感染：(1)匀浆进行病毒分离及体外激活实验；(2)PCR、RT-PCR分别检测HCMV UL83 DNA、IE DNA和相应的mRNA；(3)石蜡包埋切片用于原位杂交和免疫荧光，分别检测HCMV UL83 DNA、IE DNA和HCMV pp65抗原的表达；(4)戊二醛固定，超薄切片用透射电镜观察大脑皮层神经元超微结构变化和疱疹样病毒颗粒。在确定的HCMV潜伏感染小鼠脑组织的基础上，通过如下实验观察HCMV潜伏感染引起小鼠大脑皮质的AD样的病理改变：(1)HE染色观察大脑皮质神经病理学改变；(2)刚果红染色观察淀粉样斑块；(3)浸银染色观察神经元纤维缠结并计数单位面积中神经元和神经元纤维缠结的数目；(4)免疫荧光检测Tau蛋白的表达；(5)透射电镜照片计数突触数密度。同时对剩下的另一半小鼠进行免疫抑制干预，诱导HCMV的体内再激活，以进一步确定HCMV的潜伏安徽医科大学硕士学位论文感染。按15Omg/kg的剂量给各组小鼠腹腔注射环磷酞胺，每隔六天注射一次，如此共注射三次，在最后一次注射后的第六天处死所有小鼠，取小鼠大脑皮质戊二醛固定，透射电镜观察疤疹样病毒颗粒。结果(l)病原学检测结果:①病毒感染组实验结果:匀浆病毒分离为阴性，但经体外激活后可见到典型的HCMV致CPE;可扩增出HCMV UL83和IE DNA且序列测定结果与Genbank上登录的基因序列比较相一致;RT一PCR未见特异性的条带;原位杂交试验进一步证明HCMV DNA存在于大脑皮质神经元细胞的胞浆内:免疫荧光未检测到pp65抗原的表达;透射电镜观察可见小鼠大脑皮质神经元核内出现丝状包涵体，未找到疙疹样病毒颗粒，但经体内激活后，病毒感染组小鼠大脑皮质神经元胞浆内及血管内皮细胞中均观察到典型的疙疹样病毒颗粒。②以上结果对照组均为阴性。(2)病理学检测结果:HE染色发现感染组小鼠大脑皮质神经元数量减少，出现红色斑块及神经元纤维缠结，但对照组未发现明显的病理改变;刚果红染色从感染组小鼠大脑皮质观察到淀粉样斑块;浸银染色从感染组小鼠大脑皮质可同时观察到淀粉样斑块和神经元纤维缠结，对照组小鼠大脑皮质也发现个别的神经元纤维缠结。同对照组相比，感染组小鼠大脑皮质tan蛋白沉积团块分布密集，神经元纤维缠结数目显著升高，突触数密度和单位面积中的神经元数目则显著降低 (P0 .01)。结论1.首次建立 HCMV潜伏感染老龄小鼠模型，为阐明HCMV在脑组织的潜伏感染机制奠定了重要基础。 2.首次发现HCMV感染老龄小鼠大脑皮质神经元内呈较规则折叠的丝状包涵体，为研究老年小鼠神经元结构与功能间关系提供新线索。 3.首次建立HCMV潜伏感染老年小鼠AD样神经病理学模型，为人类探索研究AD 病提供理论和实验依据。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R-332

【参考文献】