用酵母双杂交体系研究与FMRP相互作用的蛋白

发布时间：2020-06-07 23:05

【摘要】：脆性X综合征是最常见的遗传性智力低下疾病，其主要临床表现为程度不等的智力低下、巨睾和长脸、大耳等典型的面部特征。其致病基因为脆性X智力低下基因1(fragile X mental retardation gene 1，FMR1)。FMR1基因的低表达或不表达导致脆性X综合征各种临床表现。 FMR1基因编码的蛋白FMRP的功能研究一直是脆性X综合征分子机制研究的焦点。人们从FMR1基因表达的调控及其在各种组织中和各发育阶段的表达、FMR1基因的选择性剪接表达、FMRP与RNA的相互作用、FMRP与其它蛋白的相互作用以及FMRP在细胞中的定位等多方面对其功能进行了研究。认为FMRP可能与mRNA的代谢有关，可能参与翻译调节等生物过程。但目前对其具体功能仍不明确。本工作从与FMRP相互作用蛋白的角度出发，，寻找FMRP与已知细胞过程的联系，试图给FMRP功能研究提供有用的信息。 酵母双杂交体系是研究蛋白-蛋白相互作用的一种很有效的方法，它将相互作用的两个蛋白分别与转录因子的DNA激活结构域和转录激活结构域融合成两个杂交体，在酵母中通过报告基因表达情况反映两蛋白间的相互作用。通过筛库还可以直接得到与目的蛋白相互作用蛋白的DNA序列。 我们采用酵母双杂交体系研究FMRP与其它蛋白的相互作用，主要内容分以下两部分： 1、用酵母双杂交体系研究六种FMRP天然异构体与FXR1的相互作用。 FXR1、FXR2是与FMR1高度同源的两个基因，它们编码的蛋白均能与FMRP相互作用。相互作用的区域定位在FMRP的第7外显子。为了研究FMR1基因选择剪接表达对FMRP与FXR1相互作用的影响，我们选择由FMR1第12、14、15外显子不同选择剪接表达产生的6种FMRP异构体，用酵母双杂交体系研究它们与FXR1的相互作用。这六种异构体均为组织中天然存在的异构体。iso 1为全长FMRP，iso7为缺少12外显
【图文】：

中国协和医科大学博士学位论文图1.5、各种FMRI异构体PIBTMl6l质拉的酶切鉴定MI:入DNA/Hind111，MZ:pBR322旧infl，l一12为FMR异构体l一12图1·6、各种FMRI异构体/pBTMll6重组质拉5’连接处的序列浏定

1.5、各种FMRI异构体PIBTMl6l质拉的酶切MI:入DNA/Hind111，MZ:pBR322旧infl，l一12为FMR异图1·6、各种FMRI异构体/pBTMll6重
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：1998
【分类号】：R346

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本文编号：2702125