硝基酪氨酸介导感染性休克大鼠血管低反应的病理机制及抗氧化剂的治疗作用

发布时间：2020-06-08 00:09

【摘要】：第一章 硝基酪氨酸对正常大鼠(-肾上腺素能受体介导 血管反应性的影响 目的:应用活体动物和离体动脉环张力实验观察硝基酪氨酸(3 nitro L tyrosine,3-NT)对健康大鼠(-肾上腺素能受体介导血管反应性的影响并探讨其机制。 方法:活体动物实验 雄性SD大鼠随机分成对照组(n = 12)和3 - NT组 (n = 12)。两组动物分别于注入生理盐水和3 - NT(2.5 (mol/kg)30 min、90 min后,静脉注射(1-肾上腺素能受体激动剂去氧肾上腺素(PE; 0.5～2.5 (g/kg)或垂体加压素(1.3 ～ 5.2 (g/kg),记录注药后MAP的增加百分比。血管环张力实验 健康雄性SD大鼠处死后取出胸主动脉,制成动脉环并置于Krebs- Ringer液中,以累加给药方式给予PE(10-9 ～ 3 ( 10-5mol/L)建立PE的剂量 反应曲线;五次清洗后,将标本随机对半分为重复对照组(Krebs- Ringer液)和3 - NT组(含有250 (mol/L 3 - NT Krebs- Ringer液)孵化60 min后,重复上述PE激发的血管收缩反应。 结果 注射3-NT(2.5 (mol/kg)后明显抑制PE引起的MAP增高且呈时间依赖性,与对照组相比有显著差异(P 0.05),而对垂体加压素引起的MAP增高没有影响。在血管环张力实验中,对照组及3-NT组对PE的浓度反应曲线和Emax、EC50均没有显著差异。 结论 3-NT选择性抑制了(1-肾上腺素能受体介导的血动力学反应但这种作用似乎与竞争性拮抗(-肾上腺素能受体无关,提示3-NT可能通过其他未知的途径干扰(-肾上腺素能受体介导的血管反应性。 第二章 硝基酪氨酸对血管平滑肌细胞α1D-肾上腺素能受体 mRNA表达的影响 目的:探讨硝基酪氨酸(3-nitro-L-tyrosine,3 - NT)对大鼠血管平滑肌细胞α1D-肾上 WP=5 腺素能受体表达的影响。 方法:贴壁法原代培养大鼠血管平滑肌细胞,将细胞随机分成两组:①浓度组:不同浓度(1、10、100、200 umol/L)3- NT分别干预24小时;②时间组:100 umol/L 3- NT分别干预12、24、48、72小时。利用RT-PCR检测两组细胞α1D-肾上腺素能受体(α1D- AR)mRNA的表达量的改变。 结果:随着3 - NT干预浓度的增高,血管平滑肌细胞α1D-肾上腺素能受体(α1D- AR)mRNA的表达量呈逐步下降的过程,与未干预组相比,最大可降低28.8%(P 0.05)。与之相对应的,各时间点α1D-肾上腺素能受体mRNA的表达量也呈逐步下降的过程,48小时达到最低,较之未干预组下降了34.9%(P 0.05)。 结论 3 - NT浓度及时间依赖性降低了α1D-肾上腺素能受体mRNA的表达,可能是临床某些病理状态下(如感染性休克)出现血管低反应的原因之一。 第三章 抗氧化剂对感染性休克大鼠血管低反应性的抑制作用 及机制探讨 目的: 观察异丙酚、尿酸和5-甲氧色胺三种抗氧化剂对感染性休克大鼠血管低反应性的抑制作用并探讨其机制。 方法: 50只SD大鼠随机分成五组:①对照组(n = 10);②感染性休克组(n = 10):LPS(Sigma)15mg/kg 静脉注射;③异丙酚治疗组(n = 10):注射LPS 1h后异丙酚10 mg/kg静脉注射, 继以10 mg/kg· h静脉持续泵入;④尿酸组( 注射LPS 1h后200 mg/kg i.p, n = 10)。⑤阳性对照组: 5-甲氧色胺治疗组(注射LPS 1h后10 mg/kg i.p, n = 10)注射LPS 6 h后,各组动物静注去氧肾上腺素(PE, 0.5 - 2.5 (g/kg),记录注药后MAP的增加百分比。所有in vivo实验结束后取大鼠胸主动脉环作张力实验,建立PE的剂量-反应曲线并计算相应的Emax、EC50值。注射LPS 6h后检测各组动物血浆丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和3-NT的浓度。 结果:静脉注射PE后,休克组动物MAP的增长率与对照组相比显著降低(P 0.01);而异丙酚组、5-甲氧色胺组及尿酸组MAP对PE的反应较之休克组分别增高了29.4%、43.05% 和37.7%(P 0.05)。休克组大鼠胸主动脉环对PE反应的Emax、EC50值与对照组相比明显减弱,差异显著(P 0.05),而三组治疗组胸主动脉环对PE反应的Emax、EC50值与休克组比较有明显改善。表明异丙酚、5-甲氧色胺和尿酸治疗后血管反应性有显著改善。休克组动物血浆MDA、NO和3-NT的含量明显增高,与对照组相比有显著差异(P 0.05)。经三种 WP=6 抗氧化剂治疗后血浆MDA、NO和3-NT的含量明显低于休克组(P 0.05)。 结论:抗氧化剂通过有效清除氧自由基,减少脂质过氧化物的形成,抑制体内NO的过量合成,继而减少了3-NT的产生,从而改善休克动物的血管低反应性,对临床感染性休克病人循环机能障碍的治疗可能有积极作用。
【图文】：

1.1 ONOO-依赖性途径感染性休克时细菌内毒素及炎症介质激活体内的一氧化氮合酶（NOS）,以左旋精氨酸为底物发应生成 NO 和瓜氨酸[7]。同时，活化的中性粒细胞释放出大量的超氧阴离子（O2-），，NO 与 O2-反应的速度是正常状态下超氧化物歧化酶与 O2-反应速度的 3 倍，因此感染性休克时大量产生的 NO 迅速与 O2-反应生成多种活性氮物质（NO2、N2O3、ONOO-），其中过氧亚硝基阴离子（ONOO-）是主要产物。在 37。C、PH 7.4 的生理环境中，ONOO-的半衰期为 1 秒。而ONOO-与 CO2的反应速度远远快于 ONOO-的衰变时间，反应生成的中间产物（ONOOCO2）使 ONOO-的硝基化作用加强。ONOO-介导的酪氨酸硝基化过程主要包括：1、ONOO-在金属酶（如 CuSOD、HRP、MPO）的催化作用下与 Fe3+活性中心反应形成中间产物（oxo-Fe4+）和 NO2，NO2与酪氨酸的芳香环结合生成 3-NT[8]；或 ONOO-在水合作用下生成共扼酸——ONOOH，后者分解产生 NO2，或质子化形成具有高度活性的基团——ONOOH*，NO2与 ONOOH*进一步结合至酪氨酸或酪氨酸残基形成硝基酪氨酸。2、ONOO-/ONOOH 与酪氨酸直接反应，第一步生成酪氨酰自由基（TYR.）

学位论文酸硝基化的发生与活化的吞噬细胞（包括中胞）直接相关。用 3-NT 的单克隆抗体进行浆内及细胞周围均有 3-NT 的阳性表达[10]。硝基化是硝基酪氨酸形成的主要途径之一。产物之一，也是髓过氧化物酶（MPO）和乳过50 umol·L-1）的 NO2-能有效竞争其他的底物。ADPH 氧化酶的作用下释放出 O2-、MPO 和 LPO，参与作用下，MPO 或 LPO 的金属离子发生电化 NO2-
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R363

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本文编号：2702207