绵羊脐带和羊水间充质干细胞的分禽培养及鉴定

发布时间：2017-03-28 12:05

  本文关键词：绵羊脐带和羊水间充质干细胞的分禽培养及鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：间充质干细胞(Msenchymal stem cells, MSCs)是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞。MSCs存在于动物胎儿和成体多种组织中,目前已经从多个物种的多种组织中提取分离出MSCs,而研究最多的MSCs主要是骨髓源的MSCs。本研究以绵羊脐带和羊水组织为材料来源,分别采用酶消化法和离心分离法培养获得目的细胞,并大量冻存了第三代的细胞。然后,以第五代细胞为实验对象,对得到的细胞进行了形态学、生长性能、表面标志等方面的鉴定,最后,进行成脂、成骨、成软骨的诱导分化,验证其多能性。结果显示分离得到的细胞形态均一,呈现成纤维样细胞形态,增殖能力旺盛,在体外传代培养至20代时细胞仍然保持良好的生物学性状；传代至第20代时,仍具有正常二倍体核型(2n=54)；免疫细胞化学检测显示细胞表达表面标记CD13、CD29、CD44、CD90和CD106,不表达造血干细胞标志基因CD45。结果表明本研究分离得到的细胞具备MSCs的生物学特性。进一步通过细胞染色及实时定量PCR技术验证了其体外诱导分化能力,结果显示：成脂诱导后,细胞经油红-O染色可见明显脂滴,RT-PCR显示成脂细胞特异性基因硬脂酰CoA去饱和酶(SCD)、过氧化物酶体增殖物激活受体G(PPARG)表达呈阳性；成骨诱导后,经AgN03染色后可见钙盐沉积,实时定量PCR显示成骨细胞特异性基因胶原蛋白Ⅰ(BGLAP)表达呈阳性；成软骨诱导后,经阿利新蓝染色后呈蓝色,PCR显示成软骨特异基因光蛋白聚糖(LUM)和双链蛋白聚糖(BGN)表达呈阳性,以上结果表明所分离的MSCs可以成功向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞分化。综上所述,我们成功建立了绵羊MSCs分离、纯化及鉴定平台,得到了绵羊脐带和羊水MSCs,有望用于后续研究。
【关键词】：绵羊 脐带 羊水 间充质干细胞
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 缩略词及中英文对照表9-11
• 第一章 绵羊间充质干细胞的研究进展11-25
• 一、MSCs的生物学特征11-14
• 1.1 MSCs的来源及定义11-12
• 1.2 MSCs的表面标志12-13
• 1.3 MSCs的可塑性13
• 1.4 MSCs的免疫原性13-14
• 二、绵羊MSCs的生物学特性14-15
• 2.1 绵羊MSCs的来源14
• 2.2 绵羊MSCs的表面标志14-15
• 2.3 绵羊MSCs可塑性15
• 三、绵羊MSCs的应用研究15-17
• 3.1 骨缺陷的应用16-17
• 3.2 瓣膜缺陷的应用17
• 3.3 其他应用17
• 四、存在的问题以及前景17-18
• 参考文献18-25
• 第二章 绵羊脐带和羊水间充质干细胞的分离培养及鉴定25-45
• 一、引言25-26
• 二、实验材料和方法26-36
• 2.1 实验材料和仪器26-29
• 2.2 实验方法29-36
• 三、实验结果36-44
• 3.1 形态学观察36-37
• 3.2 第20代细胞核型37-38
• 3.3 增殖能力检测38-39
• 3.4 表面标志检测39-40
• 3.5 体外多向分化能力检测40-44
• 四、讨论44-45
• 结论45-46
• 参考文献46-50
• 致谢50

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