人细小病毒B19中国株VP1蛋白独特区基因片段克隆及序列分析

发布时间：2020-06-30 06:51

【摘要】： 目的：人细小病毒B19是一种可致人类多种疾病的小 DNA病毒，主要经呼吸道和血液途径传播，可引起社区局部流行。自1990年我们首次证实我国存在该病毒感染后，陆续报告B19病毒是我国孕妇非免疫性流产、儿童急性再障危象、急性血小板减少性紫癜等疾病的重要病因之一。同时，我国妇女和儿童血清中保护性抗体水平低，易发生该病毒感染。尤其免疫功能低下或缺陷患者可发生持续感染和慢性贫血，危及生命。B19病毒是由5.6Kb核苷酸组成，编码一个非结构蛋白（NS1）和两个结构蛋白（VP1、VP2）。B19壳蛋白主要由 VP2蛋白组成，VP1蛋白不超过壳蛋白的10％，其独特区暴第四军医大学硕士学位论文一露在病毒的表面。B19病毒的抗原表位区集中在VPI独特区和 VP IVPZ连接区。只有 HPVB VPI独特区和 VPI－VPZ 连接区基因编码的蛋白，才能刺激机体产生保护性抗体。国外证明该病毒基因随地区不同有较大变异。但流行的病毒中国株基因是否有变异，国内尚无报告。基因克隆及蛋白表达技术，是近年来分子生物学发展的重要标志。国内尚无利用此技术研究＊病毒基因变异的报道。此方法的开创性引入，将为改变国内目前诊断性试剂依赖进口及制备B19病毒疫苗做出有益的开创性尝试。本文拟对VPI独特区基因克隆，进行基因组核昔酸序列分析及蛋白的初步表达，研究其基因的变异。方法：采用自行设计的一对引物，以 PCR法从一例 1999 年12月份在本院儿科确诊为再生障碍性贫血患儿血清扩增出480hp的VPI独特区基因片段，将其与PUC19质粒连接。成功构建了VPIP 质粒，并进行测序分析及初步的蛋白诱导、表达，获得了初步表达。结果：＊与国外己发表的B19 W株的VPI独特区序列相比，有二处核昔酸发生改变，占核昔酸总数的 4二 7％ Q／480人并可致所编码的氨基酸变化：第2594位由C变为 A，相应的氨基酸由组氨酸变为天冬酚氨；第2624位由A变为G，相应的氨基酸由大冬酚氨变为天冬氨酸。重复3个克隆，测序结果同前。u）与国外己发表的其它株相比，其核昔酸序列也不完全相同。O）蛋白电泳结果显示出新的蛋白电泳带，分子量与预期大小基本相符，为B19病毒的VPI独特区蛋白。．。M抄二痞匀辽．、．．札．乞e．产甜＼j“二栩C．／／工L民纂一义梆二凸贼t大二理td盾t—J产J——已N。、、【jH．。二人心。。＿“卜二1W—．9—地0证以沏0岁o感O邱森】0幽b文0以－2－第四军医大学硕士学位论文一结论：（1）本文采用自行设计引物，用PCR的方法能扩增出目的基因片段，扩增产物为480hp。Q）中国B19病毒VPI 独特区基因与国外相应的基因相比，有 2处变异。o）VPI独特区基因的变异导致了其编码蛋白的变异。H）VPI独特区基因的成功克隆及相应蛋白的初步表达为制备B19病毒诊断性试剂及保护性疫苗、防治B19病毒感染、控制其社区局部流行开创了广阔的前景。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R373

【参考文献】