念珠菌基因酶切分析及生物素探针的研究

发布时间：2020-07-01 19:15

【摘要】：念珠菌是人类最常见的机会致病菌，可引起从皮肤粘膜表浅感染到内脏各系统感染的广谱病变。由于在真菌的鉴定分类中传统的表型生物学方法程序繁琐，结果的重复性差，所以人们对此类菌的致病性及流行病学等了解甚少。DNA探针杂交技术提供了有效可靠的研究手段。本文从DNA的提取，染色体DNA酶切分析，核酸分子杂交以及光敏生物素标记核酸探针与同位素探针的比较等方面对念珠菌进行了研究。 首先采用蜗牛酶破壁获得原生质体，以SDS溶解细胞，经酚、氯仿抽提纯化，获得染色体DNA。 第二，对6种常见致病性念珠菌标准株的DNA用EcoRI进行限制性酶切，经琼脂糖凝胶电泳，可见各种念珠菌具有不同的带型。其中白念株菌(白念)出现EB染色明显的3条带，其分子量为4.9、3.7、2.5kb。白念临床分离株(6株)与标准株的酶切带型一致。这些菌经传代培养后再做酶切，其带壁不变。提示(1)这3条带型为白念的基因特点；(2)此带型具有很好的稳定性和重复性，因而DNA的EcoRI酶切图可作为白念菌种鉴定和流行病学调查的参考。 第三，通过白念DNA酶切图的分析，回收了标准株CliDNA2.2～3kb范围的片段。用~(32)P经缺口转移标记后作为探针，分别与各种念珠菌、隐球菌和细菌做Southern和斑点印迹杂交。结果所有白念株与Cli2.5kb片段杂交阳性。5株近平滑念珠菌和1株热带念珠菌与2.2～3kb片段有微弱的杂交信号，其他菌均未出现杂交。表明白念CliDNA2.5kb片段可能含有白念种特异性碱基序列，经进一步克隆证实后可以作为白念菌种鉴定和种内分型的有用探针。 第四，分别用6—氨基己酸光敏生物素和生物素交联光敏补骨脂素标记探针进行杂交。经A—AP系统显色，6—氨基己酸光敏生物素标记活性为1pg，标记探针与靶DNA杂交可检测至100pg以下，与全细胞DNA杂交，检测敏感性在125pg。其检测敏感性与同位素探针相同，较光敏补骨脂素高约10倍，另外，两种光敏生物素标记探
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：1991
【分类号】：R346
【图文】：

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【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 吴明;基因扩增技术的一次重大改进[J];生物化学与生物物理进展;1990年04期

2 何笑松;;生物素标记核酸技术[J];生物工程学报;1986年01期

本文编号：2737166