超抗原与免疫耐受的研究

发布时间：2020-07-01 19:16

【摘要】： 超抗原(superantigen,SAg)是一组既能与MHC-II结构结合，又能激活表达适当的V_β-TCR的T细胞的有二重功能的蛋白质分子。在SAg刺激下，T细胞出现增殖、凋亡、无能等一系列变化。SAg被用于体内外周T细胞耐受的模型中，对体内T细胞免疫反应的耐受的研究具有重要意义。本研究目的是探讨在超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素(SEB)诱导外周T细胞免疫耐受的作用机制。方法：用SEB体外刺激C57BL／6J(B_6)小鼠的脾细胞。以MTT染色法测定细胞A值，检测细胞增殖状况；用PI染色法经流式细胞仪(FCM)分析不同时相处于S期、G_0-G_1期的T细胞及无能T细胞的凋亡情况，并测定分析B细胞、T细胞亚群及MHC-I(H-2K~b)表达的变化；通过琼脂糖凝胶电泳观察了不同时间段T细胞凋亡的DNA特征；苏木素染色，光镜下观察凋亡小体。结果：部分去除CD8~+T细胞后，SEB可刺激B6小鼠脾细胞中CD4~+T细胞的大量增殖。在SEB刺激第3天，CD4~+T细胞中处于S期的比率最大，此后即开始下降，而处于G_0-G_1期的CD4~+T细胞变化则相反；在初刺激第3天，增殖的CD4~+T细胞出现无能，用FCM、DNA ladder、苏木素染色光镜下观察均证实在第7天时无能CD4~+T细胞出现凋亡，且凋亡的比率逐渐增多，不因加入抗CD3抗体、ConA、SEB、IL-2和APC逆转；在SEB刺激后，CD4~+T细胞表面分子MHC-IH-2K~b的表达随细胞无能的出现而明显降低。结论：CD4~+T细胞在SEB刺激后虽有增埴，但增殖后的CD4~+T细胞的增殖能力逐渐下降，对二次抗原刺激增殖受抑，即处于无能状态；无能先于凋亡出现，无能CD4~+T细胞的产生与凋亡无关；无能T细胞的凋亡是逐渐发生的，与重要营养素的缺乏、毒性代谢产物的积聚无关。SEB诱导的免疫耐受可能与其所引起的体内CD4~+T细胞无能、凋亡及下调节细胞表面分子MHC-I的表达有关。
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R392

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